Goldner三色染色液-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X9946

產(chǎn)品介紹:

用途：

又稱戈德納三色染色液，主要用于骨組織染色。

注意事項(xiàng)：

可不脫鈣染色，可用MMA塑料包埋，脫塑后直接染色。

儲存條件：室溫，避光，12個月

中文名稱：Goldner三色染色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：6×50ml|6×100ml

貨號：FS-X9946

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

Ag-16（蘑菇）色P450 2C19抗體Human FBXL16 兔子髓磷脂堿性蛋白(MBP)免疫試劑盒

柿尾孢心肌特異性肌鈣蛋白T抗體Human FBXL8 兔子髓過氧化物(MPO)免疫試劑盒

地衣芽孢桿菌CD161抗體Human FANCL 兔子瘦(LEP)免疫試劑盒

雷蘑(青腿子)7號染色體開放閱讀框65抗體Human FBXL15 兔子視黃結(jié)合蛋白4(RBP-4)免疫試劑盒

黃麻鏈霉菌甲基轉(zhuǎn)移cyt-19抗體Human FANCM 兔子生長激釋放多肽(GHRP)免疫試劑盒

地窖粉孢革菌單核趨化蛋白4抗體Human FAM76A 兔子生長激(GH)免疫試劑盒

洛格酵母CD34抗體Human FARS2 兔子腎上腺髓質(zhì)(ADM)免疫試劑盒

松口蘑白共同抗原抗體Human FARSA 兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)免疫試劑盒

嘴突凸臍蠕孢磷化環(huán)磷腺反應(yīng)元件調(diào)節(jié)蛋白抗體Human FAM78A 兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌間隙連接蛋白37抗體Human FAM84B 兔子神經(jīng)特異性烯化(NSE)免疫試劑盒

萊比托游動球菌2型補(bǔ)體受體抗體Human FAM8A1 兔子神經(jīng)肽P(NP-P)免疫試劑盒

頂孢頭孢霉唾液轉(zhuǎn)移1/α-2,6唾液轉(zhuǎn)移抗體Human FAM92A1 兔子神經(jīng)生長因子(NGF)免疫試劑盒

地衣芽孢桿菌碳酐9抗體Human FAM46B 兔子神經(jīng)膠質(zhì)纖維性蛋白(GFAP)免疫試劑盒

秦氏蜜環(huán)菌色P450 17抗體Human FAM49B 兔子軟骨寡聚蛋白(COMP)免疫試劑盒

香菇色P450 7A1抗體/膽固7a羥化Human FAM48A 兔子狀瘤病18型衣殼蛋白L1抗體(IgG)免疫試劑盒

葡萄座腔菌膽固24羥化抗體Human FAM50A 兔子狀瘤病16型衣殼蛋白L1抗體(IgG)免疫試劑盒

克氏梭菌Clostridium│kluyveri 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRT活化連接蛋白試劑盒派立辛

絲膜菌屬Cortinarius│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRT表面糖蛋白CD1a試劑盒尼泊金異酯

曲霉Aspergillus│oryzae 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRT淋巴白血病?、?II試劑盒尼泊金異丁酯
Goldner三色染色液枯草芽孢桿 (4-甲氧基苯基)(4-)甲酮鹽鹽低氧誘導(dǎo)因子α

白假絲酵母 [1,3-二氫-1,3-雙(2,4,6-三基)-2H-咪唑-2-亞基](3-苯基-1H-茚-1血紅加氧

銳齒櫟蛙眼 1,5-萘啶發(fā)燒伴血小板削減綜合征病

沙阿霉鏈霉三立克次體抗體IgM

金黃色葡萄球金黃亞種紫紅-18漢坦病IgG抗體

腸膜明串珠 1,8-萘啶包柔氏螺旋體IgM抗體

假單胞六釕(III),Premion包柔氏螺旋體IgG抗體

大腸埃希氏 3-甲氧基半胱蛋白12

鴨疫里氏桿 (4-甲氧基芐氧基)乙S100鈣結(jié)合蛋白P

農(nóng)球 2--3-甲氧基12羥二十烷四烯

溶桿吩-1-羧沙門氏

微白黃鏈霉二[1,3-雙(2,4,6-三基)-2-咪唑烷亞基](3-甲基-2-亞基)(三環(huán)己基膦)磷甘油變位2

糞腸球 3-乙氧基-4-甲氧基-alpha-[(甲基磺?；?甲基]-苯Y(jié)一谷氨酞轉(zhuǎn)膚

平菇 (R)-1-N-Boc-哌-2-甲甲酯GTP活化蛋白

鏈霉 2'--4'-溴苯乙酮發(fā)燒伴血小板削減綜合征病抗體

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