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貨號 | FS-X10367 |
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產(chǎn)品介紹:
英文名稱:ALW-II-41-27 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg ALW-II-41-27是一種新穎的Eph receptor抑制劑,用于癌癥研究。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1186206-79-0 別名:Eph receptor tyrosine kinase inhibitor 純度:99.59% 分子量:607.69 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
中文名稱:Eph receptor抑制劑(ALW-II-41-27)
英文名稱:ALW-II-41-27
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號:FS-X10367
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
細枝孢磷化中心粒蛋白Nudel抗體Human P3(Caspase-3) 晶體蛋白β(Cryβ)
嗜中溫寒冷桿菌類固脫氫樣蛋白NSDHL抗體Human CYCS(Cytochrome c) 晶體蛋白α(Cryα)
弓形蟲(NT株)磷化核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體Human APOA1(Apolipoprotein A-I) 緊密連接蛋白1(ZO1)
運動節(jié)桿菌磷化1型神經(jīng)纖維瘤抗體Human NOS1/nNOS(Nitric oxide synthase, brain) 金屬肽含血小板反應(yīng)蛋白1(ADAMTS1)
短短芽孢桿菌磷化谷受體2B抗體Human APOC1(Apolipoprotein C-I) 金屬硫蛋白2(MT-2)
根瘤菌磷化核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體Human PDGFB(Plaet-derived growth factor subunit B) 金屬硫蛋白2(MT2)
漢遜德巴利酵母磷化核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體Human APCS(Serum amyloid P-component) 金屬硫蛋白(MT)
根瘤菌磷化核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體Human P1(Caspase-1) 金葡菌腸(SE)
銀灰口蘑磷化核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體Human CDH5(Cadherin-5) 解整合樣金屬蛋白9(ADAM9)
亮白曲霉磷化IKB α抗體Human IFNW1(Interferon omega-1) 解整合樣金屬蛋白8(ADAM8)
磷化IKB alpha抗體Human DLK-1(Protein delta homolog 1) 解整合樣金屬蛋白33(ADAM33)
毛頭鬼傘(雞腿菇)磷化核因子活化T胞漿蛋白2抗體Human SOST(Sclerostin) 解整合樣金屬蛋白19(ADAM19)
枯草芽孢桿菌還原型輔Ⅱ氧化5/煙酰腺二核磷抗體Human PYY(Peptide YY) 解整合樣金屬蛋白15(ADAM15)
楊葉點霉增殖相關(guān)蛋白NANOS2抗體Human ANGPTL3(Angiopoietin-related protein 3) 解整合樣金屬蛋白12(ADAM12)
枯草芽孢桿菌核因子/k基因結(jié)合核因子 p52/p100抗體Human ACO1(Aconitase 1) 解整合樣金屬蛋白10(ADAM10)
露濕漆斑菌磷化核因子/k基因結(jié)合核因子p100抗體Human AOC3(Membrane primary amine oxidase) 解脲脲原體抗體(UU-Ab)
南方鹽單胞菌Halomonas│meridiana 質(zhì)量規(guī)格:1500USP u/mg,豬源絡(luò)塞維
出芽短梗霉=出芽茁霉(黑酵母)Aspergillus│pullulans 質(zhì)量規(guī)格:95%,美國進口原裝絡(luò)塞琳
粘質(zhì)沙雷菌Serratia│marcescens 質(zhì)量規(guī)格:>45 U/mg,進分紅景天
Eph receptor抑制劑(ALW-II-41-27)休哈塔假絲酵母 3,4-二氟苯硫糖化血紅蛋白
安絡(luò)小皮傘* 4-羥基-2-甲基喹啉糖化血紅蛋白A1c
大腸埃希 2-硝基芴糖化血清蛋白
假單胞屬 仲丁基溴化鎂糖皮質(zhì)類固受體
少根根霉 8-硝基喹啉糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白
大腸埃希氏桿 5-硝基喹啉糖原合成
枯草芽孢桿 2--4-氟苯糖原合成激3
*灰葡萄孢 乙基二苯基膦糖原合成激3β
栗褐芽孢桿 2-溴-4-苯甲天門冬
蘋果鏈格孢 2,6-二硝基苯天門冬氨基轉(zhuǎn)移;谷草轉(zhuǎn)氨
枯草芽孢桿 2-氨基-3-甲甜菜堿高半胱甲基轉(zhuǎn)移
黑曲霉 N-Boc-5-溴-2-鐵調(diào)
葡萄座腔 9-乙?;?3,6-二咔唑同型半胱
擬黑馬朗假絲酵母 Pamabrom銅藍蛋白
Bacillus aryabhattai 2,3-二甲氧基-5-甲基-1,透明質(zhì)
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