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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>核酸檢測(cè)試劑盒>>熒光探針法>> 48T 0.1PCR管GUS基因核酸檢測(cè)試劑盒
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 分類 | 貨號(hào) |
GUS基因核酸檢測(cè)試劑盒 | 熒光探針法 | FS-P10724 |
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
PCR技術(shù)的定量原理:
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擴(kuò)增曲線
在Real-time qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
魯杰氏菌培養(yǎng)基: 471近海細(xì)菌水樣/表層海水提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 20-25℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
西方伊薩酵母培養(yǎng)基: 516模式菌株: no廢水提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 28℃ 真空冷凍干燥法
根瘤菌培養(yǎng)基: 63模式菌株: no卷莢相思提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 28 定期移植法
大腸埃希氏菌生長(zhǎng)條件: 37℃培養(yǎng)基: 33提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法;定期移植法
-1497℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
米曲霉大曲酒。模式菌株: no酒曲提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: CM0085生長(zhǎng)條件: 28-30℃
孟氏假單胞菌培養(yǎng)基: 848模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 18℃ 真空冷凍干燥法
團(tuán)青霉大洋絲狀真菌模式菌株: no沉積物/深海沉積物提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 14生長(zhǎng)條件: 10℃
黑曲霉培養(yǎng)基: CM0015釀造白酒、酒精。提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法
馬腺疫鏈球菌獸疫亞種檢驗(yàn)疫苗攻菌株模式菌株: no敗血癥豬心血提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2培養(yǎng)基: 396生長(zhǎng)條件: 37
黑曲霉甘蔗廢糖蜜深層發(fā)酵檸檬。模式菌株: no檸檬果提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: CM0085生長(zhǎng)條件: 28-30℃
-1498℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
生米卡鏈霉菌產(chǎn)生代謝產(chǎn)物具有抑菌活性模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 0012生長(zhǎng)條件: 28℃
大腸埃希氏菌培養(yǎng)基: 0032遺傳研究; 帶pMB9質(zhì)粒提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 37℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
龜裂鏈霉菌培養(yǎng)基: 820模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 29℃ 真空冷凍干燥法
威斯康星接瓶霉培養(yǎng)基: 14模式菌株: no梨果實(shí)提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 26 定期移植法
梔子苷京尼平苷CFTR(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator) 囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)因子抗原VLDL Receptor 極低密度脂蛋白受體抗體
大麥芽堿CG6856-PA peptide CG6856-PA抗原Vitamin D Receptor/VDR 維生素D3受體抗體
厚樸酚CGA(Chromogranin A) 嗜鉻粒素A抗原Vitamin D Binding protein 維生素D結(jié)合蛋白抗體
和厚樸酚CGB(Chromogranin B) 嗜鉻粒素B抗原Visfatin-1(CT) 內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(C端抗體)
番瀉苷AChRM1(muscarinic acetylcholine receptor) 蕈堿型乙酰膽堿受體M1抗原Viperin/RSAD2 病抑制蛋白Viperin抗體
番瀉苷BChRM3 peptide 蕈堿型乙酰膽堿受體M3抗原VIP receptor 2/VPAC2 腺苷環(huán)化酶激活肽受體-II/血管活性腸肽受體-II抗體
標(biāo)準(zhǔn)品CK18(Cytokeratin 18) 角蛋白18(多肽)VIP Receptor 1/VAPC1 血管活性腸肽受體-1抗體
番瀉苷CCK18 peptide 角蛋白18多肽抗原VIP 血管活性腸肽抗體
番瀉苷DCK18(Cytokeratin 18) 角蛋白18抗原(C端)Vinculin 粘著斑蛋白抗體
紫草素左旋紫草素CK14/17/42/10 peptide 角蛋白14抗原Vimentin 波形蛋白抗體
GUS基因核酸檢測(cè)試劑盒Hexareline 海沙瑞林 質(zhì)量規(guī)格:>97%
Iloperidone 伊潘立 質(zhì)量規(guī)格:>97%
Iloperidone 伊潘立(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:>97%
Imipenemmonohydrate 亞胺培南 質(zhì)量規(guī)格:>97%
Imipenemmonohydrate 亞胺培南(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:>97%(HPLC),BC
Indapamide 吲達(dá)帕胺 質(zhì)量規(guī)格:>97%(TPOMethod)
Indapamide 吲達(dá)帕胺(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:>97%(TPOMethod)
Iopamidol 帕醇(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:>97%(TPOMethod)
Iopamidol 帕醇 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BC
LoperamideHCl 鹽洛哌丁胺 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BiotechGrade
LoperamideHCl 鹽洛哌丁胺(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR
KetorolacTromethamine 咯氨丁三醇 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR
KetorolacTromethamine 咯氨丁三醇(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR
Lansoprazole 蘭索拉唑 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR
Lansoprazole 蘭索拉唑(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR
PCR檢測(cè)試劑盒:
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中,按100g:3ml的比例加入Trizol試劑,嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol(按3ml/100mg組織,寧多勿少)置于玻璃勻漿器中勻漿后,冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中,4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中,室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol,振蕩15s,室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相,移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol,振搖,置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min,EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清,紙巾吸干,加入75%乙醇1ml,振搖,充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇,空氣干燥10min(可離心加快干燥,盡量吸盡離心液體)。
(12)半透明時(shí)將RNA溶于去核酸酶的水20ul中(可吹打混勻),-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度,所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳,顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
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