參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：CTP2-CP4-EPSPS基因核酸檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：48T  0.1PCR管
產(chǎn)品貨號：FS-P10723
產(chǎn)品分類：熒光探針法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
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實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實(shí)時熒光定量PCR：
實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴(kuò)增或同一時間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定，因此，實(shí)時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴(kuò)增（其中一個引物為熒光標(biāo)記）。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強(qiáng)度，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn)，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實(shí)現(xiàn)定量檢測目的。
ATCC19897=CBS483.68=CCRC11466=DSM40147=IFO12模式菌株模式菌株: yes種屬: Streptomyces│cremeus提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0329生長條件: 28℃

 -1492℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

裂褐層孔菌培養(yǎng)基: 14模式菌株: no子實(shí)體提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 25 定期移植法

刺孢殼培養(yǎng)基: 14煙草發(fā)酵煙草提供形式: 凍干物模式菌株: no生長條件: 25-28℃ 真空冷凍干燥法；定期移植法

泡盛曲霉培養(yǎng)基: CM0015以淀粉為原料發(fā)酵檸檬。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法

河豚素假交替單胞菌培養(yǎng)基: 471微生物/耐冷菌;產(chǎn)酶微生物/產(chǎn)蛋白酶、酯酶水樣/海冰提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長條件: 15℃ 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

依氏假交替單胞菌生物轉(zhuǎn)化微生物/固氮菌模式菌株: no沉積物/表層沉積物提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 471生長條件: 28℃

熱帶假絲酵母近海酵母模式菌株: no沉積樣/秋茄根底泥提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 513生長條件: 28℃

 -1493℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

大腸埃希氏菌培養(yǎng)基: 0033遺傳研究提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 30℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

紅色鏈霉菌生長條件: 28C培養(yǎng)基: CM0039提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥

鏈格孢培養(yǎng)基: 14模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 25 定期移植法

乳乳球菌研究分析模式菌株: no乳汁提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 55生長條件: 37

ATCC491=BCRC14868=CCUG24088=CIP102089=DSM20107=KCTC1441=LMG16327=NBRC3747=NRRLB-404模式菌株: yes安全等級: 1種屬: Cellulomonas│udaCompost提供形式: 凍干物模式菌株培養(yǎng)基: 7

炭疽芽胞桿菌培養(yǎng)基: CM0116研究提供形式: 其他安全等級: 3模式菌株: no生長條件: 37℃ 真空冷凍干燥法

 -1494℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

植CDK6 (Cyclin Dependent Kinase 6)  周期素依賴性激酶6抗原VTG  魚、青鳉魚卵黃蛋白原抗體

龍膽苦苷CDK7/Cyclin H/MAT1  周期素依賴性激酶7抗原VSV-G tag  VSV-G tag標(biāo)簽抗體

膽CDK8(Cyclin Dependent Kinase 8)  周期素依賴性激酶8抗原VSIG4  T淋巴負(fù)調(diào)節(jié)蛋白抗體

豬去氧膽Cdkn1c/p57/Kip2 (Cyclindependent kinase inhibitor 1C)  周期蛋白依賴激酶抑制因子1C抗原VRK1  牛痘病相關(guān)激酶1抗體（絲氨/蘇氨蛋白激酶VRK1）

去氧膽CGP-39/YKL-40(Chitinase-3-like protein 1 )  軟骨糖蛋白39（多肽）VPS4a  液泡分選蛋白4抗體

芝麻素CEA(Carcinoembryonic Antigen )peptide  人癌胚抗原抗原VPS18  空泡分選蛋白18抗體

芝麻林素Cecropin  抗菌肽/天蠶素（多肽）VP2  重組豬細(xì)小病VP2蛋白抗體

標(biāo)準(zhǔn)品HER2 receptor(erbB-2 isoform 2)  c-erbB-2受體抗原VNN1  血管非炎癥分子1抗體

左旋多巴ErbB-3/HER3(Epidermal growth factor receptor3)  表皮生長因子受體3(抗原)VMAT2  腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體

紫杉C-erbB-4/HER4/erbB-4 (epidermal growth factor receptor4)  c-erbB-4癌基因抗原VMAT1/VAT1  嗜鉻顆粒胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白VAT1抗體
CTP2-CP4-EPSPS基因核酸檢測試劑盒Epinastine HCl　鹽依匹斯汀　質(zhì)量規(guī)格：>97%

Epinastine HCl　鹽依匹斯汀(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>97%

Eplerenone　依普利　質(zhì)量規(guī)格：>97%

Eplerenone　依普利（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>97%

Etodolac　度　質(zhì)量規(guī)格：>97%

Etodolac　度(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>97%

Etonogestrel　孕烯　質(zhì)量規(guī)格：>97%

Everolimus;RAD001　依維莫司　質(zhì)量規(guī)格：>97%

FluocinoloneAcetonide　醋氟輕松;醋膚輕松　質(zhì)量規(guī)格：>97%

FluocinoloneAcetonide　醋氟輕松;醋膚輕松(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>97%

Flupirtinemaleate　馬來氟吡汀　質(zhì)量規(guī)格：>97%

Flupirtinemaleate　馬來氟吡汀(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>97%

Fulvestrant　氟維司群　質(zhì)量規(guī)格：>97%

Gestodene　孕二烯　質(zhì)量規(guī)格：>97%

Gestodene　孕二烯(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>97%
PCR的反應(yīng)條件：
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小，設(shè)定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實(shí)驗(yàn)可2℃間隔進(jìn)行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴(kuò)增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時間太短時，會得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。