實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

PCR技術(shù)的定量原理：
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擴(kuò)增曲線
在Real-time qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于液中。
PCR檢測(cè)試劑盒：
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時(shí)將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
枯草芽孢桿菌枯草亞種生長(zhǎng)條件: 37℃培養(yǎng)基: 0002提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

酵母菌培養(yǎng)基: 0013葡萄酒酵母提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 25-28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

金黃色葡萄球菌培養(yǎng)基: CM0100模型菌株可用于新藥篩選提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 2模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 37C 定期移植法

蠟蚧輪枝菌生長(zhǎng)條件: 26℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no

盧森坦海旋菌海洋石油污染生物修復(fù)/生物活性物質(zhì)篩選模式菌株: no水樣/近海海水提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 471生長(zhǎng)條件: 28℃

 -1488℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

枯草芽孢桿菌枯草亞種生長(zhǎng)條件: 30℃培養(yǎng)基: 0002提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

產(chǎn)氨短桿菌生長(zhǎng)條件: 30℃培養(yǎng)基: CM0002提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法

青霉屬菌產(chǎn)生真菌素模式菌株: no枯枝枯葉提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: CM0014生長(zhǎng)條件: 26C

木霉培養(yǎng)基: 0014模式菌株: no植物提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 18-26℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

海神鹽單胞菌培養(yǎng)基: 471微生物/耐冷菌水樣/海冰提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 15℃ 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

乳乳球菌研究分析模式菌株: no乳汁提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 55生長(zhǎng)條件: 37

 -1489℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

解脂亞羅酵母生長(zhǎng)條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0013提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Penicillium chrysogenum Thom模式菌株: 未知

橡膠樹假絲酵母模式菌株模式菌株: yes花提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 0013生長(zhǎng)條件: 25℃

芍藥苷CD146/MCAM  黑色素瘤粘附分子CD146抗原Wnt6  信號(hào)通路Wnt6抗體

鼠李糖ANPEN/CD13(Aminopeptidase N)  氨肽酶N抗原WNT5A  信號(hào)通路Wnt5a抗體

甜菜堿CD14(cluster of differentiation antigen 14)  CD14/內(nèi)素受體抗原WNT4  信號(hào)通路Wnt4抗體

鹽甜菜堿CD28  CD28抗原Wnt3a  信號(hào)通路Wnt3a抗體

甜菊苷CD166/ALCAM(activated leukocyte celladhesion molecule)  活化白粘附分子抗原WNT2B  信號(hào)通路Wnt2B抗體

天麻素CD177/NB1 peptide  嗜中性?？乖瑿D177抗原WNT2  信號(hào)通路Wnt2抗體

熊果CD24  CD24抗原Wnt16  信號(hào)通路Wnt16抗體

標(biāo)準(zhǔn)品CD2AP (CD2-associated protein)  白分化抗原CD2APWNT12/WNT10B  信號(hào)通路WNT10B抗體

熊果苷CD33 peptide(human)  CD33抗原（人）Wnt11  信號(hào)通路Wnt11抗體

辛弗林CD33/Siglec-3(mouse ret)  CD33抗原(大、小鼠）WNT10A  信號(hào)通路WNT10A抗體
CP4-EPSPS基因核酸檢測(cè)試劑盒ClomipramineHCL　鹽米帕明/鹽丙咪嗪（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(GC)

ClopidogrelBisulfate　硫氫吡格雷I型　質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(GC)

ClopidogrelBisulfate　硫氫吡格雷II型(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(GC)

ClopidogrelBisulfate　硫氫吡格雷II型　質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(HPLC)

Nabumetone　萘丁美/萘普　質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(HPLC)

Nabumetone　萘丁美/萘普（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(HPLC)

Darunavir　地瑞拉韋　質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(HPLC)(T)

Methoxydienone　沃氏物　質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(N)

DL-α-Hydroxyglutaricaciddisodiumsalt　DL-α-羥基戊二二鈉　質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(T)

DemecariumBromide　地美胺　質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(T)

Desogestrel　去氧孕烯　質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(T)

Desonide　地索奈德　質(zhì)量規(guī)格：>96.5%,BR

Gabexatemesylate　甲磺加貝酯　質(zhì)量規(guī)格：>96.5%，BS

Gabexatemesylate　甲磺加貝酯(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>96.5%,工業(yè)級(jí)

Dexamethasone　地塞米松,氟美松　質(zhì)量規(guī)格：>97%