p110δ抑制劑(CAL-101)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10365

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：p110δ抑制劑(CAL-101)

英文名稱：CAL-101

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號(hào)：FS-X10365

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：CAL-101

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

CAL-101是一種有效的選擇性的p110δ抑制劑，IC50為2.5nM，比作用于其他I類PI3K酶(抑制p110α，p110β和p110γ;IC50分別為820，565和89nM)選擇性高40到300倍。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：870281-82-6

別名：GS-1101;Idelalisib

純度：98.38%

分子量：415.42

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

黃曲霉*絲/蘇蛋白激NEK8抗體Human LTB4R(Leukotriene B4 receptor 1) 人抗BP180抗體(anti-BP180-Ab)

*灰葡萄孢核孔蛋白Nup37抗體Human AGRP(Agouti-related protein) 人抗BB抗體(BB-Ab)

漫游孢囊菌屬核結(jié)構(gòu)蛋白5抗體Human GHSR(Growth hormone secretagogue receptor type 1) 軍團(tuán)菌抗原(LP Ag)

枯草芽孢桿菌 B核結(jié)合蛋白1抗體Human PPY(Pancreatic prohormone) 軍團(tuán)菌抗體IgM(LP Ab-IgM)

稻麥穗孢霉核結(jié)合蛋白2抗體Human SERPINA3(Alpha-1-antichymotrypsin) 軍團(tuán)菌抗體IgG(LP Ab-IgG)

無(wú)花果曲霉乙?；D(zhuǎn)移10抗體Human APOE(Apolipoprotein E) 軍團(tuán)菌抗體IgA(LP Ab-IgA)

芹側(cè)耳（杏鮑菇）絲/蘇蛋白激Nek7抗體Human AGT(Angiotensinogen) 卷曲蛋白8(FZD8)

傳染性法氏囊病病神經(jīng)正五聚體1抗體Human CTNNβ1(Catenin beta-1) 聚集蛋白(Agrin)

金太陽(yáng)杏葉細(xì)菌性穿孔病煙酰核轉(zhuǎn)氫抗體Human SERPINA3(Alpha-1-antichymotrypsin) 巨噬移動(dòng)因子(MIF)

青灰紅菇利鈉肽受體B抗體Human AGT(Angiotensinogen) 巨噬移動(dòng)抑制因子(MIF)

金黃殼囊孢菌利鈉肽受體C抗體Human CTNNβ1(Catenin beta-1) 巨噬炎性蛋白5(MIP-5)

大腸埃希氏菌磷化谷受體2B抗體Human APOE(Apolipoprotein E) 巨噬炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)

木糖葡萄球菌磷化谷受體2B抗體Human HIF1A(Hypoxia-inducible factor 1-alpha) 巨噬炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)

木霉NADPH氧化2抗體Human MAP2K5(Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 5) 巨噬炎性蛋白2(MIP-2)

構(gòu)巢曲霉NADPH氧化活化蛋白1抗體Human IAPP(Islet amyloid polypeptide) 巨噬炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)

孢小克銀漢霉輪生變種磷化核因子抗體Human NOS3/eNOS(Nitric oxide synthase, endothelial) 巨噬炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)

綠色木霉=木木霉Trichoderma│viride 質(zhì)量規(guī)格：BR,RZ>2.5,活性>250U/mg槲皮

鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：≥500IU/mg,BR,牛源提取槲皮

鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：≥3TIU/mg,進(jìn)分,來(lái)源: 牛肺或牛胰花旗松；二氫槲皮
p110δ抑制劑(CAL-101)蛾微桿 BOC-D-4-嗜性粒陽(yáng)離子蛋白

假土曲霉 D-葡萄糖二-1,4-內(nèi)酯一水受體TNFRSF結(jié)合絲蘇激1

里亞氏須腹雙(頻哪合)二受體酪激

美澳型核果褐腐病 2-氨基-5-氟苯受體相互作用蛋白1

釀酒酵母 3-氨基-5-羥基吡唑瘦

淡紫擬青霉 N-(2-羧苯基)甘瘦受體

球形芽孢桿 2-硝基肉桂雙氫睪酮

哈茨木霉 2-水通道蛋白1

鐮刀屬 3,5-雙（三氟甲基）苯水通道蛋白2

枯草芽孢桿奎寧鹽鹽二水合物水通道蛋白3

蠟狀芽孢桿 4-喹啉水通道蛋白4

露濕擬漆斑 2-乙苯水通道蛋白5

黃多孔 2,4-二溴死亡受體5

龜裂鏈霉龜裂亞種 2,5-二溴四氫生物蝶呤

少根根霉戴爾變種 8-溴-2-甲基喹啉松弛肽;松弛
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)