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當前位置：上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學試劑>>抑制劑激活劑>> 2OG oxygenase抑制劑（IOX1）
| 貨號 | FS-X11014 |
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英文名稱：IOX1
產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號：FS-X11014
產(chǎn)品介紹:
IOX1是2OG oxygenase高效廣譜抑制劑，包括JmjC去甲基化酶家族，對KDM4A和KDM3A的IC50值分別為0.6uM和0.1uM。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ 號：5852-78-8 純度：97.04% 分子量：189.17 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
蠟狀芽孢桿菌Pseudomonas fluorescens大鼠過氧化物體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)
黑曲霉Pseudomonas fluorescens大鼠環(huán)孢A(CsA)
桿狀毛霉Pseudomonas fluorescens大鼠環(huán)孢A(CsA)
波氏假性阿利什霉Pseudomonas fluorescens大鼠超敏C反應蛋白(hs-CRP)
三葉草根瘤菌Pseudomonas fluorescens大鼠超敏C反應蛋白(hs-CRP)
洛斯里被毛孢Pseudomonas fluorescens大鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)
金福菇Pseudomonas fluorescens大鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)
壁芽孢桿菌Pseudomonas fluorescens大鼠抗內(nèi)膜抗體(EMAb)
蘇云金芽孢桿菌庫爾斯塔克亞種Pseudomonas fluorescens大鼠抗內(nèi)膜抗體(EMAb)
裂褶菌Pseudomonas fluorescens大鼠低密度脂蛋白免疫復合物(LDL-IC)
釀酒酵母Pseudomonas fluorescens大鼠低密度脂蛋白免疫復合物(LDL-IC)
草木樨中華根瘤菌Pseudomonas fluorescens大鼠15脂加氧(15-LO/LOX)
平菇(PL185)Pseudomonas fluorescens大鼠15脂加氧(15-LO/LOX)
大豆慢生根瘤菌Pseudomonas fluorescens大鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)
沃氏富鹽菌Pseudomonas fluorescens大鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)
油菜假單胞菌Pseudomonas fluorescens大鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)
早老蛋白-1抗體苜蓿莖點霉超氧化物歧化(SOD)分型測試盒(羥胺法)
突觸后密度蛋白95抗體污黑腐皮殼總超氧化物歧化(T-SOD)比色法測試盒(羥胺法)
一種腫瘤抑制基因抗體N端禾谷鐮孢菌還原(GR)比色法測試盒
甲狀旁腺激相關蛋白抗體三隔鐮刀菌總超氧化物歧化(SOD)比色法測試盒(WST-1 法)
2OG oxygenase抑制劑（IOX1）乳桿屬 泰樂
平沙綠僵 復合蛋白保護劑HPD
絲軸黑粉* 復合蛋白保護劑DSP50
金產(chǎn)色鏈霉 復合蛋白保護劑DP7
大腸埃希氏 復合蛋白保護劑DP4
孢淡灰鏈霉 蛋白保護劑AEP-HBC
草青霉 (S)-2-苯基甘甲酯鹽鹽
腐皮鐮孢 (L)-2-甲
淺紫灰鏈霉淺紫灰亞種 叔丁氧羰基-L-谷5叔丁脂
灰褐牛肝 BOC-L-谷5芐脂
害艾美耳球蟲 Fmoc-S-三苯甲基-L-半胱
Lonsdalea quercina subsp. iberica BOC-S-Trityl-L-半胱
解淀粉周培瑾氏 芴甲氧羰基-L-天冬β-叔丁酯
犁形馬勃 Boc-L-天冬4-環(huán)己酯
杰丁塞伯林德納氏酵母 顯軸買麻藤
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