實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

PCR技術(shù)的定量原理：
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擴(kuò)增曲線
在Real-time qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系，所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于液中。
PCR檢測(cè)試劑盒：
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說(shuō)明書的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時(shí)將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
地芽孢桿菌培養(yǎng)基: 859模式菌株: no砂土提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 70℃ -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;其他

 -468℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

彩色豆馬勃培養(yǎng)基: 14模式菌株: no組織塊提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 25-30 定期移植法

大腸埃希氏菌培養(yǎng)基: 33T7 RNA polymerase提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 37℃ -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；定期移植法

立枯絲核菌生長(zhǎng)條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Oriloxodonta鏈球菌模式菌株: 未知

大腸埃希菌用于科研模式菌株: no死亡鵝提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2培養(yǎng)基: 335生長(zhǎng)條件: 37

地衣芽胞桿菌潛在的生物轉(zhuǎn)化微生物/未經(jīng)過(guò)單菌驗(yàn)證的反硝化菌模式菌株: no水樣/養(yǎng)豬場(chǎng)沼氣池沼液提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 33生長(zhǎng)條件: 28℃

 -469℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

#多主殼菌培養(yǎng)基: 14模式菌株: no國(guó)槐枝干提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 25-28 定期移植法

克氏梭菌用于白酒增香。模式菌株: no酒窖提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: CM0172生長(zhǎng)條件: 30℃

繩狀青霉培養(yǎng)基: 14模式菌株: no谷物提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 28 定期移植法

枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基: CM0003模式菌株: no生清黃提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 35-37℃ 真空冷凍干燥法

 AS3.3875培養(yǎng)基: 15可制雙鏈RNA種屬: PenicilliumfuniculosumThom安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 25-26℃

棕色叢梗孢生長(zhǎng)條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

 -470℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

¤metxyl alcoholAR500ml

P1274-25MGPoly-L-Lysine L-多聚賴安 7-15萬(wàn)--25mg36

T9250-1gThymidine 胸腺嘧啶核苷50-89-51g

本甲基磺酰扶10ml(100mM)

MUG250mg

環(huán)己烷CyclohexaneHPLC500ml

PCR-02CP-RT-C0.2 ml PCR八排管(平蓋)198

D0340-5GVitamin H (D-Biotin) 維生素H (D-生物素)

D-(+)-Galactosamine, xy7nochloride5g

對(duì)硝基本-β-D-半乳糖苷5g

大鼠胰島素受體β(ISR-β)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人心肌肌鈣蛋白T(cTn-T)免疫試劑盒 Human cTn-T ELISA Kit

氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量測(cè)試盒 可見分光光度法 50管/48樣

Ratmaixmetalloproteinase4,MMP-4ELISA試劑盒大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HumanHemoglobinH,HbHELISA試劑盒人血紅蛋白H(HbH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Humanlipoproteinlipase，LPLELISAKit人脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
錦鯉皰疹病毒(KHV)核酸檢測(cè)試劑盒精氨雙水解酶b規(guī)格：10支/盒用途：于阪崎桿菌的生化鑒定。

一次性塑料接種針規(guī)格：25支/袋詳情介紹

副溶血性弧菌生化鑒定試劑盒（SN）規(guī)格：16支/盒用途：用于副溶血性弧菌的生化鑒定。

甘露醇發(fā)酵管d規(guī)格：10支/盒用途：用于單增李斯特氏菌的生化鑒定（SN）。

纖維二糖發(fā)酵管b規(guī)格：10支/盒用途：用于乳桿菌的生化鑒定。

葡萄糖發(fā)酵管a規(guī)格：10支/盒用途：用于單增李斯特氏菌的生化鑒定。