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TNF-α釋放抑制劑(Pomalidomide)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-18 16:24:05瀏覽次數(shù):177次

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貨號 FS-X10582
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phospho-AKT1/PKB1/2/3(pThr473)peptide 化蛋白激B抗原(絲氨化位點:473) ACS,88%
RKIP(Raf kinase inhibitor protein)

產(chǎn)品介紹:

Pomalidomide作用于LPS刺激的人PBMC細(xì)胞,抑制TNF-α釋放,IC50為13nM。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

號:19171-19-8

別名:CC-4047

純度:98.0%

分子量:273.24

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

中文名稱:TNF-α釋放抑制劑(Pomalidomide)

英文名稱:Pomalidomide

產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號:FS-X10582

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

植物乳桿菌鱗狀癌相關(guān)蛋白抗體Anti-PEDF(SERPINF1) Antibody固合成急性調(diào)節(jié)蛋白(STAR)

枯草芽孢桿菌S100鈣結(jié)合蛋白A6抗體Anti-PER1 Antibody固5α還原2(SRD5α2)

呈紫色菌核鏈霉菌S100鈣結(jié)合蛋白A11抗體Anti-PEG3 Antibody酪蛋白激1δ(CSNK1δ)

南類芽孢桿菌S100鈣結(jié)合蛋白P抗體Anti-PER2 Antibody酪蛋白κ(CSN3)

副凝聚短狀桿菌突觸樣蛋白5亞型2抗體Anti-PER3 Antibody酪蛋白β(CSN2)

稀褶黑菇絲合并蛋白3抗體(腫瘤差異表達(dá)蛋白)Anti-PF4 Antibody酪蛋白α(CSN1)

PL16(平菇)Smad核轉(zhuǎn)錄共抑制因子抗體Anti-PF4 Antibody酪(TYR)

嗜中溫溫暖桿菌SET易位蛋白/髓系白血病相關(guān)蛋白抗體Anti-PF4 Antibody酪轉(zhuǎn)(TAT)

膠孢SET易位蛋白/髓系白血病相關(guān)蛋白抗體Anti-PF4 Antibody酪激2(Tyk2)

 轉(zhuǎn)基因玉 MON89034 品系絲/蘇/酪激STYK1抗體Anti-PFN2 Antibody酪磺基轉(zhuǎn)移2(TPST2)

釀酒酵母鈉通道蛋白11α抗體Anti-PFN1 Antibody酪磺基轉(zhuǎn)移1(TPST1)

玫煙色棒束孢鈉離子通道β1抗體Anti-PGF Antibody酪3/色5單加氧激活蛋白ζ(YWHAζ)

木耳(雪白林)導(dǎo)向蛋白3B抗體Anti-PGF Antibody狼瘡腦抗原(LBA1)

膠凍樣芽胞桿菌鈉通道蛋白8α抗體Anti-PGK1 Antibody蘭尼定受體3(RYR3)

解脂亞羅酵母絲/蘇蛋白激SRPK1抗體Anti-PGR Antibody蘭尼定受體1(RYR1)

具黃曲霉絲蛋白抑制劑B12抗體Anti-PGK1 Antibody賴酰氧化樣蛋白4(LOXL4)

利鈉肽受體C抗體化膿鏈球菌人乳腺癌組織源細(xì)胞提取物

A型流感-NS1抗體神經(jīng)1摩氏變形菌人甲狀腺癌組織源細(xì)胞提取物

高度相似的細(xì)胞周期蛋白激NEK6抗體索氏梭菌人膀胱癌組織源細(xì)胞提取物

膜內(nèi)在蛋白NOD26抗體平滑正青霉(斜面)人腎癌組織源細(xì)胞提取物
TNF-α釋放抑制劑(Pomalidomide)大腸埃希 硫卷曲霉谷脫羧

癭青霉 Fmoc-N-甲基-L-異亮休克蛋白70

膜醭假絲酵母 四金 水合物谷脫羧

香菇 Fmoc-3-(2-萘基)-D-精激

芽孢桿 四金鈉 二水合物總蛋白

白色類諾卡氏 2-基苯環(huán)磷腺

冷桿 (R,R)-DACH-苯基 Trost 配體葡萄糖-6-磷脫氫

棘抱曲霉 六銠(III)鄰苯二甲二丁酯

氨桿 4-頻哪酯磷脂酰

鹽索氏 硫鋱(III) 八水合物己糖

植物乳桿 N-乙-3-甲線粒體呼吸鏈復(fù)合物I

產(chǎn)氣莢膜梭       C型 Irbesartansirt1去乙酰化

類布氏乳桿 DL-高瓜煙酰腺二核

球孢白僵 四溴鈀狀腺原

土壤球 溴化鈥(III)甲狀腺

 


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