實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
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參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因玉米品系T25核酸檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：48T   0.1PCR管
產(chǎn)品貨號：FS-P10735
產(chǎn)品分類：熒光探針法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
PCR的反應(yīng)條件：
因擴增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設(shè)定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。
致病性大腸埃希菌生長條件: 37℃培養(yǎng)基: CM0051提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no 真空冷凍干燥法

鏈格孢培養(yǎng)基: 0014模式菌株: no植物提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 25℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

阿穆斯基灣鹽水桿菌海洋石油污染物生物修復(fù)/生物活性物質(zhì)篩選模式菌株: no水樣/近海海水提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 821生長條件: 28℃

 -1522℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

游動放線菌菌屬抗S04模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0027生長條件: 28C

亞德食烷菌有機污染物降解菌/石油烴類降解菌模式菌株: no水樣/深層海水提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 821生長條件: 25℃

芬氏纖維微菌海洋放線菌模式菌株: no沉積物/重力活塞取樣提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 471生長條件: 28℃

青霉生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0015提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

ATCC55148模式菌株: no安全等級: 1種屬: Lactobacillus│reuteri雞肉提供形式: 凍干物治療家禽腸道細菌感染；延緩和改善慢性腸炎；用于益生菌類保健食品。培養(yǎng)基: CM0006

黃曲霉培養(yǎng)基: 0015模式菌株: no發(fā)霉松果提供形式: 凍干物安全等級: 2生長條件: 25-28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

 -1523℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

山扁豆生棒孢生長條件: 28℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no

北極假交替單胞菌培養(yǎng)基: 471微生物/耐冷菌水樣/深層海水提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長條件: 15℃ 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

根瘤菌固氮模式菌株: no銀珠根瘤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 63生長條件: 28-30

牛葡萄球菌用于科研模式菌株: no患病奶牛提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 335生長條件: 37

蠟狀芽孢桿菌生長條件: 35-37℃培養(yǎng)基: CM0003提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法

異土木香內(nèi)酯Endostatin  內(nèi)皮抑素/內(nèi)皮他丁抗原UBR2  泛素蛋白連接酶E3α2抗體

鹽藥根堿EpCAM(Epithelial cell adhesion molecule)  上皮粘附分子/表皮粘附分子（多肽）UBOX5/RNF37  泛素結(jié)合酶7相互作用蛋白5抗體

白屈菜紅堿EpCAM/CD326(Epithelial cell adhesion molecule)  上皮粘附分子/表皮粘附分子抗原UBL7  泛素樣蛋白7抗體

血根堿E.coli O6 (Escherichia coli O6)  E.coli O6大腸桿菌菌體蛋白Ubiquityl Histone H2A.X (Lys119)  泛素化組蛋白H2AX抗體

兩面針堿EPEC/E.coli(enteropathogenic E．coli，EPEC)  普通大腸埃希菌菌體蛋白（非致病性）Ubiquitin/UBC/UB  泛素蛋白抗體

高三尖杉酯堿EphA1 R(Ephrin A1 Receptor)  EphA1-R受體抗原UBF1  核仁轉(zhuǎn)錄因子1抗體

北美芹素EPOR peptide  紅生成素受體抗原UBE2W  泛素蛋白連接酶W抗體

利血平phospho-ERK1/MAPK-1/2(pThr183 + pTyr185)  磷化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗原UBE2V1/UEV1A  泛素結(jié)合酶E2變異體1抗體

白楊素ERK(Extracellular signal-regulated kinase)  絲裂原活化蛋白激酶抗原UBE2U  泛素蛋白連接酶U抗體

石榴皮鞣素MAPK1/ERK3 (Mitogen-activated protein kinase 3; P44MAPK)  絲裂原活化蛋白激酶3抗原UBE2Q1  泛素蛋白連接酶Q1抗體
轉(zhuǎn)基因玉米品系T25核酸檢測試劑盒Mecillinam　美西林/氮脒青霉素　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)

Medroxyprogesterone　甲羥孕/安宮黃體素　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)

Medroxyprogesterone　甲羥孕(標準品)　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)

Methimazole　甲巰咪唑/他巴唑/2-巰基-1-甲基咪唑　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)

Methimazole　甲巰咪唑(標準品)　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)

Methocarbamol　美索巴莫　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)

Methocarbamol　美索巴莫（標準品）　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)

Methylprednisolone　甲基潑尼松龍　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)

Methylprednisolone　甲基潑尼松龍（標準品）　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)

MexiletineHydrochloride　鹽美西律（慢心率）　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)

MexiletineHydrochloride　鹽美西律（標準品）　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)

Mezlocillinsodium　美洛西林鈉　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)

Mezlocillinsodium　美洛西林鈉(標準品)　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)

Mifepristone　米非司　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)

Mifepristone　米非司（標準品）　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)