GSK-3抑制劑(LY2090314)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10695

中文名稱：GSK-3抑制劑(LY2090314)

英文名稱：LY2090314

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10695

產(chǎn)品介紹:

LY2090314是一種有效的GSK-3抑制劑，能夠作用于GSK-3α和GSK-3β，IC50值分別為1.5nM和0.9nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：603288-22-8

純度：99.75%

分子量：512.53

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

福氏志賀氏菌神經(jīng)生長因子受體的一種（抗原）Anti-CCDC88A AntibodySciellin蛋白(SCEL)

運動節(jié)桿菌重組生長分化因子8/肌肉抑制Anti-CCDC106 AntibodySATB同源框蛋白1(SATB1)

總狀毛霉原變型神經(jīng)生長因子受體的一種（抗原）Anti-CCL14 AntibodySarcosynapsin蛋白(SRYP)

粗毛栓菌神經(jīng)生長因子受體的一種（抗原）Anti-CCDC88A AntibodySalusinβ蛋白(Salusinβ)

曲霉促甲狀腺受體（抗原）Anti-CCL20 AntibodySalusinα蛋白(Salusinα)

芽孢桿菌半胱蛋白8抗原Anti-CCL15 AntibodySaitohin蛋白(STH)

芽孢桿菌屬促甲狀腺受體（抗原）Anti-CCL2(MCP-1) AntibodySacsin蛋白(SACS)

枯草芽孢桿菌酪羥化（抗原）Anti-CCL20 AntibodyS100鈣結(jié)合蛋白B(S100B)

金色鏈霉菌微管蛋白（抗原）Anti-CCL27 AntibodyS100鈣結(jié)合蛋白A9(S100A9)

大腸埃希氏桿菌質(zhì)膜微囊蛋白-1抗原Anti-CCL3 AntibodyS100鈣結(jié)合蛋白A8(S100A8)

釀酒酵母 β-連環(huán)蛋白抗原（β-β鏈接）Anti-CCL4L1 AntibodyS100鈣結(jié)合蛋白A7(S100A7)

硬結(jié)節(jié)桿菌磷化β-連環(huán)蛋白抗原Anti-CCNA1 AntibodyS100鈣結(jié)合蛋白A6(S100A6)

固氮菌微管蛋白（抗原）Anti-CCNA1 AntibodyS100鈣結(jié)合蛋白A5(S100A5)

黃曲霉核凋亡誘導(dǎo)因子蛋白1(多肽)Anti-CCNA1 AntibodyS100鈣結(jié)合蛋白A2(S100A2)

淺黃褐蠟傘組織蛋白B抗原Anti-CCNA2 AntibodyS100鈣結(jié)合蛋白A14(S100A14)

枯草芽孢桿菌組織蛋白L抗原Anti-CCNB1 AntibodyS100鈣結(jié)合蛋白A13(S100A13)

細胞膜鈣ATP4抗體越南伯克霍爾德氏菌小鼠單核巨噬細胞白血病細胞

細胞膜鈣ATP4B抗體西伯利亞庫特氏菌人B淋巴細胞瘤細胞

細胞膜鈣轉(zhuǎn)運ATP抗體Viridibacillusarenosi小鼠主動脈血管平滑肌細胞

溶質(zhì)載體蛋白家族21成員2抗體Rummeliibacillusstabekisii人高轉(zhuǎn)移肝癌細胞
GSK-3抑制劑(LY2090314)Pantoea eucalypti 2-(2-乙氧基)乙脂肪甘油三酯水解

傘枝梨頭霉 2--5-脂聯(lián)

淡青鏈霉 4-丁過氧化物體增殖因子活化受體γ

詹氏桿己二二甲酯巴貝斯抗體

黑木耳己二二甲酯雙芽巴貝斯抗體

大腸埃希 N.N-二甲基對苯二草鹽鈣激活中性蛋白1

貝葉多孔 3-鹽鹽新孢子蟲病

馬賽 2-乙基胰島樣生長因子

蠟狀芽孢桿 3--1-羥基自由基

解淀粉芽孢桿 3-溴-1-25羥基維生D

pET-22(b) 4-溴苯肼單鹽鹽α半乳糖基抗原

玫煙色棒束孢基三苯基溴化膦α半乳糖抗原

總狀共頭霉 1-苯基-1-丁炔中性粒趨化因子1

茶藨子葡萄座腔 2,2,2-三氟乙基三氟磺酯鈣;鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激激2

短小芽孢桿對甲苯異酯CD3分子

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