ALK抑制劑(Brigatinib)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10362

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：ALK抑制劑(Brigatinib)

英文名稱：Brigatinib

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM) in Ethanol|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10362

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：Brigatinib

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM) in Ethanol|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

Brigatinib是一種有效的，選擇性的ALK抑制劑，IC50值為0.6nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1197953-54-0

別名：AP-26113

純度：99.81%

分子量：584.09

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

粘著劍菌線粒體鈉/氫交換蛋白質(zhì)2抗體Human CEBPD(CCAAT/enhancer Binding Protein(C/EBP), delta) 人抗紅抗體(RBC)

喇叭菌神經(jīng)元1抗體Human BAX(Apoptosis regulator BAX) 人抗核周因子抗體(APF)

豆芽菌1-2神經(jīng)肽Y抗體Human MAPK1(Mitogen-activated protein kinase 1) 人抗核小體抗體IgG(AnuA-IgG)

枯草芽孢桿菌神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體Human CTLA4(Cytotoxic T-lymphocyte protein 4) 人抗核糖體P蛋白抗體(ARPA/Rib-P)

球孢白僵菌谷受體2B抗體Human CEACAM1(Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1) 人抗核糖核蛋白抗體(RNP-Ab)

單胞菌屬神經(jīng)纖毛蛋白2抗體Human C9(Complement component C9) 人抗核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)

枯斑擬盤多毛孢谷受體2D抗體Human BCL11B(B-cell lymphoma/leukemia 11B) 人抗核仁抗體(ANA)

香栓孔菌原癌基因N-Ras抗體Human CCL28(C-C motif chemokine 28) 人抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)

耐鹽考克氏菌T激活核轉錄因子4抗體Human NPS(Neuropeptide S) 人抗核抗體(ANA)

地下鹽單胞菌腦低密度脂蛋白受體蛋白1抗體Human GSK3β(Glycogen synthase kinase-3 beta) 人抗骨骼肌抗體(ASA)

蘇云金芽孢桿菌軸突蛋白2抗體Human CD28(T-cell-specific surface glycoprotein CD28) 人抗弓形體IgM抗體(anti-tox IgM)

殼菌腎小球粘附分子受體抗體Human APOA2(Apolipoprotein A-II) 人抗高爾基體抗體(AGAA)

變粉紅鎖擲孢酵母神經(jīng)生長調(diào)節(jié)蛋白1抗體Human CD276(CD276 antigen) 人抗肝膜抗體(LMA)

污黑腐皮殼軸突生長誘向因子G2抗體Human CTSL2(Cathepsin L2) 人抗肝胞質(zhì)1型抗體(LC1)

類干酪乳桿菌黑色瘤硫軟骨蛋白多糖4抗體Human COR(Cortisol) 人抗肝特異性脂蛋白抗體(LSP)

NDST1蛋白抗體Human GSK3β(Glycogen synthase kinase-3 beta) 人抗肝PF4復合物抗體/HIT抗體-IgM(HIT)

彎曲芽孢桿菌Bacillus│flexus 質(zhì)量規(guī)格：>250U/mg,BR苦杏仁

芽孢桿菌屬Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>2500U/MG絞股藍皂

雅致放射毛霉Actinomucor│elegans 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR金絲桃
ALK抑制劑(Brigatinib)釀酒酵母對羧基苯肼乳脫氫

黃曲霉 4-甲酰溴乳鐵蛋白

奇雄腐霉 5-硝基間苯二甲軟骨寡聚基質(zhì)蛋白

奧氏蜜環(huán) 5-羥基間苯二甲狀腺原

地衣芽孢桿順式-4-羥基-L-脯三磷腺

云芝栓孔 (變色栓) 2-甲硫基-5-嘧啶-4-甲三葉因子3

多汁乳菇 Fluvoxamine maleate色羥化

Tardiphaga 2-?；掀ぱ苌蜃?/span>

溶淀粉類芽孢桿 4-羥基-3-甲性;通透性增加蛋白

彎孢 3-噻吩神經(jīng)靶標酯

產(chǎn)紫青霉 2-TRIFLUOROMETHYLPYRAZINE神經(jīng)膠質(zhì)纖維性蛋白

球孢白僵 1,3-二氨基-2-神經(jīng)鞘氨磷

Brenneria salicis 1-(2-二甲基氨基乙基)-1H-5-巰基-四氮唑(MTZ)神經(jīng)生長因子

黃白馬杜拉放線乙錳,四水神經(jīng)絲蛋白200

黑青霉土霉神經(jīng)損傷誘導蛋白1
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)