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貨號 | FS-01S63713 |
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產(chǎn)品名稱:SNR土壤硝酸還原酶可見分光光度法
規(guī)格:50管/24樣
檢測方法:可見分光光度法
貨號:FS-01S63713
商品介紹:
測定意義 S-NR催化土壤中硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,是土壤硝態(tài)氮還原的關(guān)鍵酶。研究S-NR的活性對合理施肥,降低氮素的損失具有重要意義。 測定原理 S-NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,NO3ˉ +NADH+H+→ NO2ˉ +NAD+ +H 2 O;產(chǎn)生的亞硝酸鹽能夠在酸性條件下,與對–氨基苯磺酸及 α - 萘胺定量生成紅色偶氮化合物;生成的紅色偶氮化合物在 540 nm 有最大吸收峰,可用分光光度法測定。 需自備的儀器和用品 可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
粗酶液提?。?/span>
1、細(xì)胞或組織樣品的制備: 培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液),超聲波破碎細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。 2、血清(漿)樣品:直接檢測。 |
操作步驟:
實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。 1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。 2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。 3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。 4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。 5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。 6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。 8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進(jìn)行檢測。 |
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SNR土壤硝酸還原酶可見分光光度法乙二 99.4%鈉 分析標(biāo)準(zhǔn)品PLGF (Placenta growth factor fragment)(human) 人胎盤生長因子(多肽抗原)
三乙二二甲 99%鈉 99%PP-1 蛋白磷酯-1(抗原)
四乙二二甲 99%鈉 用于昆蟲培養(yǎng), ≥99.0%BMPR-1A(Bone Morphogenetic protein Receptor-1A) 骨成型蛋白受體1A抗原
四乙二二甲 standard for GC ,≥99.5% (GC) 對醌 97%PPAR-delta (peroxisome proliferator-activated receptor) D型-過氧化活化增生受體(多肽)
四乙二二甲 matrix substance for MALDI-MS, ≥99.5% (GC)亞磺鈉 98%PP-2A (protein phosphatase 2A) 蛋白質(zhì)磷-2A(抗原)
三乙二乙 95%對甲亞磺鈉 98%,無水物BOb-1(B-cell oct-binding protein 1) B特異性轉(zhuǎn)錄因子抗原
間二 99%對甲亞磺鈉 98%,水合物PP-2B alpha 1 蛋白磷酯-2B 催化亞單位(抗原)
氧化鋁 99.998% metals basis ,5~6μm,粉末三氟磺 98%PR (Progestogerone receptor) 孕受體(抗原)
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