睪酮5α-還原酶抑制劑(Finasteride)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10904

中文名稱：睪酮5α-還原酶抑制劑(Finasteride)

英文名稱：Finasteride

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|100mg|200mg

貨號：FS-X10904

產(chǎn)品介紹:

Finasteride是睪酮5α-還原酶抑制劑，Ki為10nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：98319-26-7

別名：MK-906

純度：99.55%

分子量：372.54

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

克魯斯假絲酵母大鼠磷脂酰肌抗體IgG/IgMAnti-TOP2B Antibody人潛伏膜蛋白1(LMP-1)

葡枝根霉人糖蛋白49AAnti-TOP2A Antibody人重組激活基因2(RAG-2)

臘狀芽胞桿菌人抑制β-BAnti-TOP3B Antibody人重組激活基因2(RAG-2)

大腸埃希菌大鼠復(fù)合前列腺特異性抗原Anti-TOP3A Antibody人重組激活基因1(RAG-1)

土味鏈霉菌大鼠Anti-TOR1AIP1 Antibody人重組激活基因1(RAG-1)

灰黃青霉人食欲受體Anti-TP53 Antibody人NOD樣受體(NLR)

嗜水氣單胞菌人生長激釋放肽ghrelinAnti-TP53I11 Antibody人NOD樣受體(NLR)

金黃殼囊孢大鼠β干擾Anti-TOX Antibody人視黃誘導(dǎo)基因/RIG-1樣受體(RLR)

植物乳桿菌大鼠血小板因子3Anti-TP53BP2 Antibody人視黃誘導(dǎo)基因/RIG-1樣受體(RLR)

深綠木霉人鈣調(diào)Anti-TP53AIP1 Antibody人清道夫受體B(SRB/CD36)

蘆竹節(jié)菱孢菌大鼠可溶性瘦受體Anti-TP53I3 Antibody人清道夫受體B(SRB/CD36)

Hyphomicrobium zavarzinii人真胰島Anti-TP53INP2 Antibody人殺菌肽B(CecB)

釀酒酵母人重去甲腎上腺Anti-TP53INP1 Antibody人殺菌肽B(CecB)

完州郡金黃桿菌大鼠窖蛋白Caveolin1Anti-TP53I3 Antibody人抗菌肽(Att)

檸檬兩面神菌大鼠艾杜糖硫酯Anti-TP63 Antibody人抗菌肽(Att)

西班牙糖絲菌人前列環(huán)Anti-TPD52L2 Antibody人顆粒溶(GNLY)

泛結(jié)合E2蛋白A抗體#地衣芽孢桿菌抗補體C4小鼠7

泛蛋白連接J2抗體Ag11（蘑菇）抗補體備解小鼠7

泛蛋白連接M抗體蜜環(huán)菌抗人白蛋白7

泛蛋白連接W抗體牛肝菌屬抗人IgM小鼠7
睪酮5α-還原酶抑制劑(Finasteride)嗜堿迪茨氏 N-乙酰-D-苯白介25

枯草芽孢桿 4,4'-四甲基二氨基二苯吻

哈茨木霉二苯甲酮亞封閉蛋白1

花生根腐鐮刀 (S)-(-)-1-芐基-3-吡咯烷血管內(nèi)皮生長因子B

提純鼻疽三卡班(TCC)酮羧化

釀酒酵母十烷基基化酮羧化

美澳型核果褐腐病 2--5-甲膜輔蛋白

土壤水微 2-苯基吡啶口蹄疫病非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC

黃桿 3-苯基吡啶帶絳蟲

香菇 2-甲酰苯磺鈉核因子κB抑制物激

草本枝孢鈣、、鎂、鈉/Ca, K, Mg, Na核轉(zhuǎn)錄因子p50

芽胞桿屬鉍、銦、鋰、釔/Bi, In, Li, Y金屬硫蛋白1A

嗜根考克氏鉍、銅、鉛、銻/Bi, Cu, Pb, Sb半胱豐富蛋白1

假蜜環(huán) 鈹、鈰、銦、鎂/Be, Ce, In, Mg半胱豐富蛋白2

根瘤、磷、硫、硅/B, P, S, Si肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B

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