PCR的反應(yīng)條件：
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小，設(shè)定25～30個(gè)循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實(shí)驗(yàn)可2℃間隔進(jìn)行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時(shí)，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時(shí), 時(shí)間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時(shí)會得不到擴(kuò)增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時(shí)，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時(shí)間太短時(shí)，會得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時(shí)間太長時(shí)，會出現(xiàn)Smear。
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參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因玉米品系Bt176核酸檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：48T   0.1PCR管
產(chǎn)品貨號：FS-P10732
產(chǎn)品分類：熒光探針法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時(shí)擴(kuò)增（其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記）。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí)，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強(qiáng)度，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn)，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實(shí)現(xiàn)定量檢測目的。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
植物乳桿菌植物亞種發(fā)酵奶等乳制品模式菌株: no自然發(fā)酵乳提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0006生長條件: 37℃

植物內(nèi)芽孢桿菌細(xì)菌模式菌株: no其他/岸邊泥沙與水的混合物提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 821生長條件: 25℃

 -1515℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

枯草芽孢桿菌枯草亞種培養(yǎng)基: 0002α-淀粉酶,蛋白酶（固體發(fā)酵）提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 37℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

大腸埃希菌培養(yǎng)基: CM0051模式菌株: no痰提供形式: 凍干物安全等級: 2生長條件: 36℃ -80℃冰箱凍結(jié)法

枯斑擬盤多毛孢培養(yǎng)基: 14模式菌株: no針葉提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 23-30 定期移植法

 F563產(chǎn)蛋白酶模式菌株: no種屬: Actinomucor│repens提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25-28℃

草菇生長條件: 25℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法；礦物油法；定期移植法

運(yùn)動魯杰氏菌培養(yǎng)基: 471近海細(xì)菌水樣/上層海水提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長條件: 20-25℃ 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

 -1516℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

不動桿菌屬培養(yǎng)基: CM0033模式菌株: no西沙諾尼成熟果內(nèi)提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 28℃ -80℃冰箱凍結(jié)法

克魯弗畢赤酵母共生微生物/魚類共生菌模式菌株: no生物樣/未知魚3胃提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 513生長條件: 28℃

青霉菌屬菌種抗黑曲霉模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0014生長條件: 26C

釀酒酵母培養(yǎng)基: CM0077發(fā)酵制面包。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法；定期移植法

假絲酵母(加詞待譯)深海酵母模式菌株: no水樣/深層海水提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 7生長條件: 28℃

青霉生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 14根際土提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no 真空冷凍干燥法

刺五加苷EDMBT1 (Deleted in malignant brain tumor 1)  DMBT1抑癌基因抗原URG4  上調(diào)基因4抗體(N端)

竹節(jié)香附素A;銀蓮花素ADNA-PKcs peptide  DNA依賴蛋白激酶催化亞基多肽抗原UQCRFS1  質(zhì)子梯度調(diào)節(jié)蛋白1抗體

常春藤皂苷BDPPA2 (developmental pluripotency associated gene2)  多能發(fā)育相關(guān)基因2抗原UQCRC2  線粒體輔酶色素C還原酶核心蛋白2抗體

柴胡皂苷ADR4/APO2/TRAILR1 (Death receptor 4)  死亡受體4抗原UQCRC1  輔酶色素C還原酶核心蛋白1抗體

柴胡皂苷CDR5/TNFRSF10B/CD262 (Death receptor 5)  腫瘤調(diào)亡素/死亡受體5抗原UPP1/Uridine Phosphorylase 1  尿嘧啶核苷磷化酶1抗體

柴胡皂苷DDP-I/DSP(desmoplakin I )  橋粒斑蛋白1抗原Unrip/STRAP  絲氨/蘇氨激酶受體相關(guān)蛋白抗體

柴胡皂苷B1DVL1 (dishevelled 1)  蓬亂蛋白1UNC93B  內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜蛋白UNC93B抗體

柴胡皂苷B2Dynamin 2(Anti-Human Dynamin-2 )  鳥苷三磷酶－發(fā)動蛋白2抗體Unc18-3  突觸囊泡融合蛋白Unc18-3抗體

土貝母苷甲Nadrin peptide  發(fā)育調(diào)節(jié)蛋白多肽抗原Ulex Europaeus Lectin 1/UEA1  荊豆凝集素1抗體

牛蒡子苷E2F1  轉(zhuǎn)錄因子E2F-1ULBP3/N2DL3  UL16結(jié)合蛋白3抗體
轉(zhuǎn)基因玉米品系Bt176核酸檢測試劑盒Flufenamicacid　氟芬那,氟滅　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)

Flufenamicacid　氟芬那,氟滅(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)

Flumazenil　氟馬西尼/氟馬澤尼　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)

Flumazenil　氟馬西尼/氟馬澤尼(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)

FluoxetineHydrochloride　鹽氟西汀　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)

FluoxetineHydrochloride　鹽氟西汀（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)

Fluvoxaminemaleate　馬來氟伏沙明　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)

Fluvoxaminemaleate　馬來氟伏沙明（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)

Formestane　福美斯坦　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)

Formestane　福美斯坦(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)

Fosinoprilsodium　福辛普利鈉　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)

Furosemide　呋塞米（速尿）　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)

Furosemide　呋塞米（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)

Gemfibrozil　吉非羅齊　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)

Gemfibrozil　吉非羅齊（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)(T)