TRPV1激動(dòng)劑(Capsaicin)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10361

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：TRPV1激動(dòng)劑(Capsaicin)

英文名稱：Capsaicin

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10361

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：Capsaicin

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|50mg|100mg

Capsaicin是一種TRPV1激動(dòng)劑，作用HEK293細(xì)胞，EC50為0.29±0.05μM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：404-86-4

別名：(E)-Capsaicin;8-Methyl-N-vanillyl-trans-6-nonenamide

純度：98.39%

分子量：305.41

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

豇豆慢生根瘤菌高分子量神經(jīng)絲蛋白抗體Human FBLN2(Fibulin-2) 人抗菌肽(Att)

檸條根瘤菌核因子/k基因結(jié)合核因子抗體Human FGG(Fibrinogen gamma chain) 人抗性磷5b(TRACP-5b)

枯草芽孢桿菌低分子量神經(jīng)絲蛋白抗體Human VIP(VIP peptides) 人抗性磷(TRACP)

(蠟狀芽胞桿菌)中分子量神經(jīng)絲蛋白抗體Human TNFRSF10A(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10A) 人抗抗體(AsAb)

芽孢桿菌生長抑制蛋白NDN抗體Human FGG(Fibrinogen gamma chain) 人抗角蛋白絲聚集/絲集蛋白抗體(AFA)

鏈霉菌神經(jīng)生長因子β抗體Human BCAM(Basal cell adhesion molecule) 人抗角蛋白抗體(AKA)

廣食黃桿菌鼻咽癌相關(guān)基因6抗體Human VIP(VIP peptides) 人抗膠原蛋白抗體(CLA)

糖化酵母鈉氫通道蛋白抗體Human CTGF(Connective tissue growth factor) 人抗甲狀腺微粒體抗體(ATMA/TMAB)

青貯窖芽孢桿菌鈉離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體Human βEP(Beta-endorphin) 人抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)

枯草芽孢桿菌神經(jīng)元特異性烯化/γ 烯化抗體Human LRP2(Low-density lipoprotein receptor-related protein 2) 人抗甲狀腺過氧化物抗體(TPO-Ab)

釀酒酵母神經(jīng)營養(yǎng)因子-3前蛋白抗體Human BMPR1A(Bone morphogenetic protein receptor type-1A) 人抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)

枯草芽孢桿菌核受體相關(guān)因子-1抗體Human CD86(T-lymphocyte activation antigen CD86) 人抗肌聯(lián)蛋白抗體(TTN)

釀酒酵母核因子2相關(guān)因子2抗體Human CXCR1(C-X-C chemokine receptor type 1) 人抗肌動(dòng)蛋白抗體(AAA)

頂青霉神經(jīng)纖毛蛋白1抗體Human C3(Complement C3) 人抗黃體生成抗體(Anti LH Ab)

扣囊復(fù)膜孢酵母神經(jīng)生長因子4/5抗體Human LPA(Lipoprotein a) 人抗環(huán)胍肽抗體(CCP)

黑紫紅菇巢蛋白NID2抗體Human CP(Ceruloplasmin) 人抗環(huán)瓜肽抗體(CCP)

桔綠木霉Trichoderma citrinoviride Bissett 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR咖啡

平田頭菇Agrocybe│pediades (Fr.) Fayod 質(zhì)量規(guī)格：BR，>7U/MG, powder氧化

白馬勃Calvatia│candida (Rostk.) Hollós 質(zhì)量規(guī)格：活力≥30000u/g
TRPV1激動(dòng)劑(Capsaicin)皺孢鏈霉 4-氨基苯頻哪酯

普通變形桿鄰氨基苯鹽鹽清道夫受體B類I型

哈茨木霉 2-基嘧啶-5-頻哪酯球蛋白

紫紅曲霉 9-蒽趨化因子配體5

環(huán)帶擬盤多毛孢 2-蒽去甲腎上腺

桔青霉 3-氨基-4-固酮

嗜松青霉 4-氨苯基鹽鹽糖還原

薄花邊傘2-1 4-乙酰氧基苯基頻吶酯缺血修飾白蛋白

擴(kuò)展青霉 3-氨基苯頻吶酯熱休克蛋白-70

鐮刀仲丁基化鎂絨毛膜促性腺β

串珠鐮刀* 3-溴化鎂溶

煙芽孢桿仲丁基鋰溶血磷脂

釀酒酵母叔丁基鋰肉堿

淡黃濕傘對(duì)甲肉堿脂酰轉(zhuǎn)移

球孢枝孢對(duì)肉堿脂酰轉(zhuǎn)移I
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)