實時熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。

PCR技術(shù)的定量原理：
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擴增曲線
在Real-time qPCR中，對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應(yīng)的進行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進入“平臺期”。在該時期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于液中。
PCR檢測試劑盒：
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
Enterococcus avium Collins et al.名稱: 小鼠雜交瘤；c7b8c1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 小鼠雜交瘤；c7b8a5 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 小鼠雜交瘤；c7b8b5 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Streptococcus pneumoniae (Klein) Chester名稱: 小鼠雜交瘤；c7b8F10 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 小鼠雜交瘤；c7b8a8 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 小鼠雜交瘤；c7b8H4 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Homo sapiens, human名稱: 小鼠雜交瘤；F6E4F8b2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Phialophora verrucosa Medlar, anamorph名稱: 小鼠雜交瘤；D11E8A1H9 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Phytophthora boehmeriae Sawada名稱: 小鼠雜交瘤；D11E8A1A4 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Umbelopsis isabellina (Oudemans) Gams名稱: 小鼠雜交瘤；D11E8A1G10 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 小鼠雜交瘤；D11E8A1E6 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 小鼠雜交瘤；D11E8A1F11 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Magnaporthe grisea (Hebert) Barr, teleomorph名稱: 雙位點HC-kit受體株；DMF7 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS；IL-3orrhGM-CSF

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 小鼠雜交瘤；D11E8A1G5 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Candida glabrata (Anderson) Meyer et Yarrow名稱: 轉(zhuǎn)PYTL基因小鼠支持；15P-1 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

Chaetomium piluliferum Daniels, teleomorph名稱: 人腎癌；769-P RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
黃熱病病毒核酸檢測試劑盒人蛋白激酶C(PKC)ELISA試劑盒PDIA3ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人肌激酶(CK)ELISA試劑盒PDIELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人丙激酶(PK)ELISA試劑盒PDIELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人鏈激酶(SK)ELISA試劑盒PEDFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人磷化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(pERK)ELISA試劑盒PEDFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人磷化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA試劑盒PEDFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人胰蛋白酶(trypsin)ELISA試劑盒PEDFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人磷烯醇式丙羧激酶(PCK)ELISA試劑盒PEDFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。