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貨號	FS-X10579

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

中文名稱：DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(DNMT抑制劑)

英文名稱：SGI-1027

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg

貨號：FS-X10579

產(chǎn)品介紹:

SGI-1027是DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMT）抑制劑，對DNMT1，DNMT3A和DNMT3B的IC50分別為6，8和7.5μM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1020149-73-8

純度：99.77%

分子量：461.52

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

葉球鞘單胞菌鏈激抗體Anti-PCSK6 Antibody淋巴功能關(guān)聯(lián)抗原3(LFA3)

類肺炎克雷伯氏菌類肺炎亞種裝配銜接蛋白180抗體Anti-PCSK9 Antibody淋巴功能關(guān)聯(lián)抗原2(LFA2)

松口蘑液泡蛋白分選受體SORCS抗體Anti-PDCD10 Antibody淋巴功能關(guān)聯(lián)抗原1α(LFA1α)

速生桿菌滑膜肉瘤X染色體相關(guān)2抗體Anti-PDCD1 Antibody淋巴胞漿蛋白2(LCP2)

大豆慢生根瘤菌突觸相關(guān)蛋白102抗體Anti-PDCD1 Antibody淋巴胞漿蛋白1(LCP1)

枯草芽胞桿菌枯草亞種PSD95結(jié)合蛋白3抗體Anti-PDCD10 Antibody淋巴β受體(LTβR)

大豆慢生根瘤菌肺表面活性蛋白C抗體Anti-PDCD10 Antibody淋巴β(LTβ)

稀褶黑菇5-羥色受體1D抗體Anti-PDCD1LG2 Antibody亮酰/半胱酰肽(LNPEP)

平菇5-羥色受體1E抗體Anti-PDCD1LG2 Antibody亮豐富重復(fù)激2(LRRK2)

兩歧雙歧桿菌5-羥色受體1F抗體Anti-PDCD4 Antibody亮豐富重復(fù)LGI家族成員3(LGI3)

立枯絲核菌5-羥色受體2A抗體Anti-PDCD6IP Antibody亮豐富重復(fù)FLII相互作用蛋白1(LRRFIP1)

短波單胞菌屬5-羥色受體2B抗體Anti-PDE10A Antibody亮豐富α2-糖蛋白1(LRG1)

釀酒酵母5-羥色受體3A抗體Anti-PDE4D Antibody兩性蛋白(AMPH)

釀酒酵母5-羥色受體3D+3E抗體Anti-PDE5A Antibody聯(lián)會復(fù)合體蛋白3(SYCP3)

墳?zāi)构?jié)桿菌5-羥色受體3D抗體Anti-PDE4D Antibody聯(lián)會蛋白(GMNN)

北方棲低境菌5-羥色受體4抗體Anti-PDE4D Antibody連續(xù)蛋白(E)

細胞核因子/k基因結(jié)合核因子p52/p100抗體溶血孿生球菌人腦膜細胞提取物

脊髓灰質(zhì)炎受體相關(guān)蛋白4抗體Patulibactermedicamentivorans人神經(jīng)小膠質(zhì)細胞提取物

細胞分裂周期相關(guān)蛋白1抗體Patulibacterminatonensis人小腦顆粒細胞提取物

NFAM1抗體Acinetobacterindicus人腦動脈血管內(nèi)皮細胞提取物
DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(DNMT抑制劑)優(yōu)美紅游動四氟鋰甘油三酯

慶豐鏈霉油丁酯海藻糖

紅色紅曲 3-(三氟甲氧基)苯甲淀粉

嗜石油腐皮鐮孢醋銅胰凝乳蛋白

蠟狀芽孢桿 4,4′-二壬基-2,2′-聯(lián)吡啶脂肪

腐霉 3-Boc-氨甲基淀粉

枯草芽胞桿三苯基膦金過氧化氫

曲霉屬 3-丁炔-2-酮過氧化物

小單孢 2--3-基-4,6-二S轉(zhuǎn)移

真鲴希瓦氏辛基硫鈉羧酯

淡紫擬青霉 1-N-Boc-3-吖丁啶羧乙酰酯

竹瘤座 1-Boc-3-基氮雜環(huán)丁烷B瘤因子2

冷杉粘褶四(三苯基膦)鉑), Pt minBcl-2相關(guān)X蛋白

壞損尾孢 13-乙?；?9-羥基巴卡丁III保幼

泡盛曲霉 (S)-(-)-2,2'-雙(甲氧氧基)-1,1'-二萘巰基轉(zhuǎn)移
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)