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貨號 | FS-X10276 |
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中文名稱:MEK抑制劑(PD98059)
英文名稱:PD98059
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10276
產(chǎn)品介紹:
英文名稱:PD98059 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg PD98059是一種MEK抑制劑,IC50為5μM,也抑制TCDD結(jié)合到芳香烴受體(AHR),IC50為4μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:167869-21-8 純度:99.45% 分子量:267.28 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
產(chǎn)氣腸桿菌(現(xiàn)1)抑制A/Inhibin α抗體Human RBM24(RNA Binding Motif Protein 24) 腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體受體3(TRAIL-R3)
布魯氏菌雞傳染性喉氣管炎病糖蛋白E抗體Human RBMS2 腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體受體2(TRAIL-R2/DR5)
不規(guī)則鹽海菌小腸型脂肪結(jié)合蛋白抗體Human RBM25 腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(TRAIL-R4)
金針菇(毛柄金錢菌、冬菇)白介-7受體a抗體Human RBM26 腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3(TRAIL-R3)
畫眉草彎孢整合α3抗體Human RBP2 腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體1(TRAIL-R1)
殼菌整合β5抗體Human ABCB5(ATP-binding cassette sub-family B member 5) 腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sTRAIL)
枯草芽胞桿菌整合α1抗體Human RBMX2 腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TRAF6)
紫紅曲霉白介2受體β鏈抗體 IL-2RβHuman RBM39 腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子1(TRAF1)
pBlueScript SK(+)干擾α2b抗體Human RBM28 腫瘤壞死因子受體超家族成員18(TNFRSF18)
馬賽菌屬誘導(dǎo)協(xié)同激分子配體CD275抗體Human RBM4 腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)
狹霉鏈霉菌雞傳染性法氏囊病病抗體Human RBM42 腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)
冷溫木拉克酵母白介-17抗體Human RBM46 腫瘤壞死因子超家族15(TL1A/TNFSF15)
松口蘑5'肌磷脫氫2抗體Human RBM41 腫瘤壞死因子γ(TNFγ)
大豆慢生根瘤菌即刻早期應(yīng)答基因5樣蛋白抗體Human RASGRP3(Ras guanyl-releasing protein 3) 腫瘤壞死因子β(TNF-β)
腸球菌屬整合αV抗體Human RBM14 腫瘤壞死因子β(TNFβ)
泡盛曲霉白介-19抗體Human RBM15 腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)化(TACE)
鼠李糖乳桿菌Lactobacillus│rhamnosus GG 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)升麻-3-O-β-D-吡喃木糖
ATCC10844=LMG2210資源名稱: 邊緣假單胞菌邊緣致病變種 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)仙鶴草B
氏假單胞菌Pseudomonas│migulae 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)馬錢
MEK抑制劑(PD98059)植物乳桿 2-羥基-6-白介28A
光孢黃叢枝珊瑚 2,4,5-三溴甲苯巨噬炎性蛋白1γ
蘋果鏈格孢 抗甲狀腺過氧化物抗體
Pseudomonas coleopterorum 2,5-二甲氧基芐N-甲基-D-天冬受體
蘇云金芽胞桿印第安那亞種 2-基-5-氟吡啶跨膜蛋白119
中國臺灣根霉 對乙DNA去甲基化轉(zhuǎn)移
葡萄座腔 3--2-β葡萄糖
干草鞘氨單胞 4-硝基愈創(chuàng)木組蛋白去甲基化轉(zhuǎn)移
Marinobacter excellens 丁酰乙乙酯過氧化物體增殖物激活受體δ
陰溝腸桿溶解亞種 3-氨基-2,2-二甲基酰Krueppel樣因子6
淡紫擬青霉 2'-乙基-6'-甲基-2-乙酰苯胰島受體β
葉片微桿 6-氟靛紅CD86分子
黑靈芝 2,3,4,6-四-O-基硅基-D-葡萄糖內(nèi)酯成纖維生長因子7
釀酒酵母 四化五烯Apelin
穿孔艾美耳球蟲 聚六胍鹽鹽蛋白激B2
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