mTOR抑制劑(PP 242)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10502

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：mTOR抑制劑(PP 242)

英文名稱：PP 242

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10502

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：PP 242

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

PP242是第一個(gè)選擇性的ATP競(jìng)爭(zhēng)性的mTOR抑制劑，IC50為8nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1092351-67-1

純度：95.34%

分子式：C??H??N?O

分子量：308.34

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

釀酒酵母TSK蛋白抗體Anti-GSDMD Antibody絨毛蛋白(CVL)

楊生毛栓菌味覺受體蛋白家族2亞基5抗體Anti-GSK3B(GSK3β) Antibody球蛋白(CYGB)

大腸埃希氏菌微管蛋白聚合促進(jìn)蛋白24Anti-GSN Antibody角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)

釀酒酵母腱糖蛋白R抗體Anti-GSN Antibody(PB0198)間粘附分子5(ICAM5)

擬青霉瞬時(shí)受體電位蛋白12抗體Anti-GSN Antibody間粘附分子4(ICAM4)

葡萄座腔菌屬結(jié)構(gòu)蛋白家族2抗體Anti-GSR Antibody間粘附分子3(ICAM3)

黑附球菌先心病相關(guān)蛋白TBX1抗體Anti-GSTA1/A2/A3/A4/A5 Antibody間粘附分子2(ICAM2)

側(cè)孢短芽孢桿菌血管生成受體2抗體Anti-GSR Antibody間粘附分子1(ICAM1)

總狀共頭霉端粒調(diào)控因子抗體Anti-GSTA1/A2/A3/A4/A5 Antibody胱硫γ裂解(CSE)

Lysinibacillus微管蛋白抗體（免疫組化用抗體）TubulinβAnti-GSR Antibody附著蛋白相互作用蛋白(CYTIP)

硬結(jié)桿菌微管蛋白抗體（免疫組化用抗體）Tubulin βAnti-GSTA1/A2/A3/A4/A5 Antibody附著蛋白4(CYTH4)

異常威克漢姆酵母酪羥化抗體Anti-Gsta3 Antibody附著蛋白3(CYTH3)

空腸彎曲桿菌酪抗體Anti-GSTM1 Antibody附著蛋白2(CYTH2)

高山被孢霉胸腺β10抗體Anti-GSTA1/A2/A3/A4/A5 Antibody附著蛋白1(CYTH1)

紫色紅曲粘附分子1抗體Anti-GSTM3 Antibody分裂周期因子25(CDC25)

pLVX Tre3G胸腺基質(zhì)淋巴生成-1抗體(人)Anti-GSTP1 Antibody分裂周期因子23(CDC23)

腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白9/前列腺六跨膜上皮抗原4抗體卡氏黃褐桿菌人膀胱成纖維細(xì)胞

絲/蘇蛋白激31抗體普通變形菌人腎足突細(xì)胞

5-羥色胺受體2C抗體鈍齒棒桿菌人腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

分泌模塊化鈣結(jié)合蛋白2抗體平滑肌相關(guān)蛋白2枯草芽孢桿菌斯氏亞種人腎系膜細(xì)胞
mTOR抑制劑(PP 242)土芽孢乳桿 2,4-二氟苯過氧化

pnz8149 3,5-二氟苯過氧化氫

構(gòu)巢曲霉 5-煙環(huán)磷腺

油菜核病 (+)-兒茶水合物黃體生成

慢弧 1，2--d4激活A(yù)

根瘤 2-苯基乙基異硫代酯卵泡抑

香菇19 三乙基氫化鋰球蛋白A

釀酒酵母 (S)-(+)-3-甲基-2-丁球蛋白G

厚垣孢普可尼亞 2,5-二嘧啶球蛋白M

淺藍(lán)灰曲霉 2--5-甲氧基嘧啶同型半胱

熱帶假絲酵母 4-溴-2-羥基苯甲褪黑

黑青霉 (S)-3,3-二甲基-2-丁褪黑受體1A

華根霉 1-溴-3-(三氟甲氧基)苯褪黑受體1B

根瘤 2-溴-6-氟褪黑受體1C

茄腐鐮刀 4-(2-噻唑基偶氮)間苯二維生D
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)