PARPl和PARP2抑制劑-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10500

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：PARPl和PARP2抑制劑

英文名稱：PJ34 hydrochloride

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10500

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：PJ34 hydrochloride

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

PJ34hydrochloride是一種有效的特異的PARPl/2抑制劑，IC50值分別為110nM和86nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：344458-15-7

純度：98.44%

分子量：331.8

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

光帽鱗傘絲/蘇蛋白激17A/DAP凋亡誘導(dǎo)蛋白激1抗體Anti-GRB14 Antibody周期D1(CCND1)

里亞氏須腹菌碳?xì)溻c協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白4-A7抗體Anti-GRB2 Antibody周期C(CCNC)

蠟狀芽孢桿菌微管卷曲蛋白SYNC抗體Anti-GRB10 Antibody周期B3(CCNB3)

角微菌磷化SH2結(jié)構(gòu)含磷肌SHIP1抗體Anti-GRB7 Antibody周期B2(CCNB2)

腐皮鐮孢菌磷化沉默調(diào)節(jié)蛋白1抗體Anti-GRB7 Antibody周期B(CCNB)

長枝木霉線粒體促凋亡蛋白抗體Anti-GREM1 Antibody周期A1(CCNA1)

鏈球菌(不定種)墨蝶蛉還原抗體Anti-GREM1 Antibody周期A(CCNA)

北方蜜環(huán)菌核突觸蛋白α+β抗體Anti-GRIA1 Antibody粘附分子1(CADM1)

枯草芽孢桿菌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白2抗體Anti-GRIA1 Antibody(PB0201)因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子3(SOCS3)

糙孢籃狀菌絲消旋Anti-GRIA3 Antibody因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1(SOCS1)

大腸埃希氏菌鈣結(jié)合樣蛋白/神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤標(biāo)記物抗體Anti-GRIA4 Antibody因子受體樣因子1(CRLF1)

匍枝根霉(黑根霉)絲/蘇蛋白激SRPK7抗體Anti-GRIA3 Antibody維甲結(jié)合蛋白2(CRABP2)

假絲酵母屬磺基葡糖硫抗體Anti-GRIA2 Antibody(PB0202)外信號調(diào)節(jié)激2(ERK2)

黑柄多孔菌免疫球蛋白μ鏈結(jié)合蛋白2抗體Anti-GRID2 Antibody外信號調(diào)節(jié)激1(ERK1)

柱枝雙孢霉痙攣性截癱相關(guān)蛋白21抗體Anti-GRIN1 Antibody外基質(zhì)金屬蛋白誘導(dǎo)因子(EMMPRIN)

產(chǎn)黃青霉G蛋白結(jié)合蛋白3抗體Anti-GRIK1 Antibody外基質(zhì)蛋白1(ECM1)

絲/蘇/酪激STYK1抗體腸沙門氏菌腸亞種人臍動脈內(nèi)皮細(xì)胞

絲/蘇蛋白激SRPK1抗體摩氏摩根氏菌人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞

導(dǎo)向蛋白3B抗體腸沙門氏菌腸亞種旺茲沃思血清型人冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞

硫酯1抗體熱生腫塊芽孢桿菌人臍動脈平滑肌細(xì)胞
PARPl和PARP2抑制劑秦氏蜜環(huán) 位十二內(nèi)酯血管內(nèi)皮生長因子A

Sphingopyxis baekryungensis 1,7-菲羅啉載脂蛋白A

赭曲霉特布他林半硫鹽載脂蛋白B100

巴氏醋桿（現(xiàn)1）雙聯(lián)(2-甲基-2,4-戊二)酯增殖核抗原抗體

Acinetobacter chengduensis 4-溴咪唑腫瘤壞死因子α

植物乳桿 4-噁唑羧乙酯3β羥基類固脫氫

圍小叢殼 4-噁唑甲P450膽固側(cè)鏈裂解

根霉 1-氨基-4-溴萘α干擾

聚生殼 4-異喹啉甲α肌動蛋白

黑木耳(黑耳9號) 2,4-噻唑烷二酮γ干擾

寒冷桿 5--2-甲氧基苯磺酰白蛋白

硬水黃桿 1-乙基化吡啶鎓白介12

高溫黃灰鏈霉 2-溴-5-甲氧基白介2

淡紫灰鏈霉 2-溴-4-吡啶白介4

玉黑粉 3-噻吩甲甲酯白介6
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)