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GBSS結(jié)合態(tài)淀粉合成酶檢測試劑盒微量法

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所  在  地上海市

更新時間:2022-04-11 16:32:13瀏覽次數(shù):187次

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貨號 FS-01S63569
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公司產(chǎn)品僅用于科研提供的生化試劑盒,質(zhì)量信得過產(chǎn)品,售后完善。服務(wù)于高校及免疫學(xué)科研單位,竭誠為您提供更周到的服務(wù)更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品。

產(chǎn)品名稱:GBSS結(jié)合態(tài)淀粉合成酶檢測試劑盒微量法
規(guī)格:100管/96樣

檢測方法:微量法

貨號:FS-01S63569
商品介紹:

測定意義

GBSS(EC 2.4.1.21)以束縛態(tài)存在于淀粉體中,催化淀粉鏈的加長反應(yīng),主要負責(zé)直鏈淀粉的合成。

測定原理

GBSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng),將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上,同時生成ADP;進一步通過反應(yīng)體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP+還原為NADPH,其中NADPH生成量與前一步反應(yīng)生成的ADP數(shù)量呈正比,通過340nm下測定NADPH的增加量,可以計算GBSS活性。

需自備的的儀器和用品

紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟:

實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進行檢測。

粗酶液提?。?/span>

1、細胞或組織樣品的制備:

培養(yǎng)細胞:先收集細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細胞數(shù)量(104個):提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1ml提取液),超聲波破碎細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;

試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
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雞趨化因子樣因子(CKLF)聯(lián)免疫試劑盒三葉草根瘤Human HSP gp96 (Heat Shock Protein glycoprotein 96) ELISA Kit

雞多巴受體D5(D5R/DRD5)聯(lián)免疫試劑盒木賊鐮孢Human HSF2 (Heat Shock Transcription Factor 2) ELISA Kit

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GBSS結(jié)合態(tài)淀粉合成酶檢測試劑盒微量法 standard for GC,>99.5%(GC)PH標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液 pH=7.00±0.02 (25℃)DR3/TRAMP (death receptor-3)  DR3 死亡受體(抗原)

98%-氯化銨緩沖溶液 pH≈10E7 protein/HPV 16 (Human papillomavirus type 16)  人瘤病16型E7蛋白抗原

99%氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.000mol/L (1N)EGF-R (Epidemal growth factor receptor)  表皮生長因子受體(抗原)

三乙 AR,99.0%氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.5000mol/L (0.5N)Eukaryotic aspartyl protease(Rice)  天冬蛋白家族蛋白(水稻蛋白的一種)(抗原)

三乙 for HPLC, ≥99.5% (GC)氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.2000mol/L (0.2N)FAM3B/PANDER(PANcreatic DERived factor)  一種新型的胰島因子(抗原)

三正 GR,99%氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.1000mol/L (0.1N)Fabp2 (fatty acid binding protein 2, intestinal)  脂肪結(jié)合蛋白2(抗原)

三正 CP,98.0%硫標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.5000mol/L(1N)ECG2 (sophagus cancer-related gene-2)  食道癌相關(guān)基因(抗原)

三正丁 GCS, ≥99.5% (GC)硫標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.2500mol/L(0.5N)Fibronectin (FN)  纖維連結(jié)蛋白(多肽抗原)

 


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