實(shí)時熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

PCR技術(shù)的定量原理：
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擴(kuò)增曲線
在Real-time qPCR中，對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于液中。
PCR檢測試劑盒：
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
 ivcas7.01222模式菌株: no安全等級: 2種屬: Bacillus│cereus牛奶提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃

芽孢桿菌培養(yǎng)基: 38模式菌株: no鹽堿土提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 37℃ 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

 -1547℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

里氏木霉培養(yǎng)基: 14分子生物學(xué)研究提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 30℃ 定期移植法

木糖氧化無色桿菌反硝化亞種以菲、芴作為碳源生長模式菌株: no石油污染土提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃

微桿菌屬模式菌株: no安全等級: 1形態(tài): 菌落形態(tài)：菌落淺黃色，圓形，表面光滑、濕潤、稍凸，不透明。諾尼根； 采集地：海南省三亞市提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: LB培養(yǎng)基：蛋白胨 10.0g，酵母粉 5.0g，NaCl 10.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。生長條件: 30℃，好氧

釀酒酵母培養(yǎng)基: CM0077發(fā)酵檸檬制果酒。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法；定期移植法

黃桿菌潛在新種，珊瑚共生菌；潛在的生物活性微生物/軟珊瑚共附生菌，用于篩選活性物質(zhì)產(chǎn)生菌模式菌株: no生物樣/軟珊瑚提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 471生長條件: 25℃

酚紅球菌微生物資源利用模式菌株: no淤泥提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0889生長條件: 30℃

 -1548℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

暗黃綠小單孢菌生長條件: 28℃培養(yǎng)基: 0027提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法；礦物油法；定期移植法

芽孢桿菌屬培養(yǎng)基: CM0033模式菌株: no西沙諾尼成熟果種子內(nèi)提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 28℃ -80℃冰箱凍結(jié)法

左旋乳芽孢桿菌培養(yǎng)基: 141模式菌株: no植物根面提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 28-30 定期移植法

CGMCC3.5795=IMI200337模式菌株模式菌株: yes種屬: Cunninghamella│blakesleana提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25℃

野野村氏菌屬菌種抗大腸桿菌模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0027生長條件: 28C

優(yōu)雅食烷菌有機(jī)污染物降解菌/石油烴類降解菌模式菌株: no水樣/上層海水提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 821生長條件: 25℃

石杉堿甲Histone H1b(Histone H1.4)  組蛋白H1b抗原TSARG6/DNAJB13  生精凋亡相關(guān)基因6抗體

川陳皮素HDAC1/HD1(histone deacetylase 1)  組織蛋白去乙?；?抗原TSARG4  生精凋亡相關(guān)基因4抗體

告達(dá)亭苷元Flag-Tag (CT)  Flag Tag標(biāo)簽多肽TSARG3/TSARG1  生精凋亡相關(guān)基因3抗體

青陽參苷元ADYKDDDDK Tag(CT)/Flag-Tag  標(biāo)簽DYKDDDDK Tag分支肽Trypsin Inhibitor/CRISP8  胰蛋白酶抑制劑抗體

青陽參苷元BT7 tag(recombinant T7-tagged proteins)  T7 tag標(biāo)簽抗原TRT/TERT  端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶抗體

補(bǔ)骨酯酚V5 tag(recombinant V5-tagged protein)  V5 tag多肽抗原TRPV4/TRP12  瞬時受體電位蛋白12抗體

決明蒽醌;美決明子素KT3 tag  KT3 tag標(biāo)簽抗原TRPV2/VRL1  辣椒素受體樣蛋白1抗體

圣草次苷VSV-G tag(vesicular stomatitis virus glycoprotein)  VSV-G tag標(biāo)簽抗原TRPV1/VR1  辣椒素受體抗體

圣草酚HLA-DR(human leukoyte Antigen DR)  HLA-DR抗原TRPM8  “冷”蛋白TRPM8抗體

草烏甲素HLA-E  人類白抗原ETRPM7  瞬時受體電位離子通道蛋白7抗體（M亞家族）
轉(zhuǎn)基因玉米品系DBT418核酸檢測試劑盒Carrageenan　卡拉膠　質(zhì)量規(guī)格：>98%

Pranlukast　普侖司特　質(zhì)量規(guī)格：>98%

Metoprololtartrate　酒石美托洛爾　質(zhì)量規(guī)格：>98%%,USP,BR

Metoprololtartrate　酒石美托洛爾（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>98%(GC),標(biāo)準(zhǔn)品

Arabicgum　阿拉伯膠　質(zhì)量規(guī)格：>98%(GC);進(jìn)分

Amlodipine　氨地平　質(zhì)量規(guī)格：>98%(HPLC),BC

Amlodipine　氨地平（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>98%(HPLC),BC

Nizatidine　尼扎替丁　質(zhì)量規(guī)格：>98%(HPLC),BC

Carboxymethylcellulose　羧甲基纖維素　質(zhì)量規(guī)格：>98%(HPLC),BC

Fludarabine　氟達(dá)拉賓　質(zhì)量規(guī)格：>98%(HPLC),BC

Fludarabine　氟達(dá)拉賓(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>98%(HPLC),BR

G-418disulfate,Geneticin　G-418硫鹽　質(zhì)量規(guī)格：>98%(HPLC),BR

Erlotinib　埃羅替尼　質(zhì)量規(guī)格：>98%(HPLC),USP

N-Acetyl-cysteine　N-乙酰-L-半胱氨(NAC)　質(zhì)量規(guī)格：>98%(T)

Zopiclone　佐匹克隆　質(zhì)量規(guī)格：＞98%(T)