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貨號(hào)	FS-X9818

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：死細(xì)胞核酸染料-綠菁SYTOX

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：500μL

貨號(hào)：FS-X9818

產(chǎn)品介紹:

SYTOX 綠色死細(xì)胞核酸染料( Ex/Em: 502/525 nm, bound to DNA)是一種可輕易穿過受損細(xì)胞質(zhì)膜而不能透過活細(xì)胞質(zhì)膜的綠色核酸染料，其在于核酸結(jié)合之后熒光強(qiáng)度會(huì)得到超過500 倍的顯著增強(qiáng)。SYTOX 綠色死細(xì)胞核酸染料可以用于染死的真核細(xì)胞的RNA和DNA，在革蘭氏細(xì)菌中同樣也適用。使用者可以利用氬激光激發(fā)器的488nm（或者其他任何帶有450-490nm 激發(fā)光源的激發(fā)器）激發(fā)染料。

SYTOX 綠色死細(xì)胞核酸染料可用于多色熒光分析，在不同的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用中染固定細(xì)胞的核酸，如，熒光顯微鏡、熒光酶標(biāo)儀，流式細(xì)胞儀上。

儲(chǔ)存：-20℃，避光，有效期6個(gè)月。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

Toll樣受體4(TLR4)英文名：TLR4 表面趨化因子受體1抗體包裝1g

Toll樣受體3(TLR3)英文名：TLR3 表面趨化因子受體2抗體包裝100g

Toll樣受體2(TLR2)英文名：TLR2 表面趨化因子受體3抗體包裝25g

Thy1細(xì)胞表面抗原(Thy1)英文名：Thy1 表面趨化因子受體4抗體包裝500g

TGFβ誘導(dǎo)早期應(yīng)答基因1(TIEG1)英文名：TIEG1 活化半胱蛋白蛋白-3抗體包裝25ml

TATA框結(jié)合蛋白關(guān)聯(lián)因子12(TAF12)英文名：TAF12 抗Ⅵ型膠原抗體包裝5ml

SRC/FGR/YES相關(guān)FYN癌基因(FYN)英文名：FYN 半胱蛋白8抗體包裝25g

Smad同源物7(Smad7)英文名：Smad7 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基8抗體包裝5g

Smad同源物3(Smad3)英文名：Smad3 表面趨化因子受體10抗體包裝1g

Smad同源物2(Smad2)英文名：Smad2 轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體包裝5g

Smad同源物1(Smad1)英文名：Smad1 鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體2抗體包裝1g

Slit同源物3(Slit3)英文名：Slit3 周期檢測(cè)點(diǎn)激1抗體包裝25g

Slit同源物2(Slit2)英文名：Slit2 鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體1抗體包裝5g

Slit同源物1(Slit1)英文名：Slit1 尾側(cè)型同源轉(zhuǎn)錄因子2/3抗體包裝1g

Sideroflexin1蛋白(SFXN1)英文名：SFXN1 周期H抗體包裝5g

白色鏈霉菌Streptomyces│albus 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A1試劑盒亞麻;Gamma linolenic

香菇Lentinula│edodes 質(zhì)量規(guī)格：>98%,國(guó)產(chǎn)美侖異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A0試劑盒野漆樹;Rhoifolin

ATCC43308資源名稱: 鰻弧菌質(zhì)量規(guī)格：>98%,異質(zhì)核糖核蛋白Q試劑盒葉黃制菌;Xanthatin
死細(xì)胞核酸染料-綠菁SYTOX藤黃微球鹽阿洛司瓊琥珀脫氫

土生哈薩克斯坦酵母 1-BOC-吡咯烷-3-甲酰類嗜TⅠ型病

短波單胞 1-Boc-3-吡咯烷甲甲酯類T白血病病抗體

凍土毛霉 2,6-二溴-4,8-雙[(2-乙基己基)氧基]-苯并[1,2-B:4,5-B']二噻吩α1受體自身抗體

柑橘莖點(diǎn) 4-甲氧基-7-氮雜半胱

變幻青霉 2-哌甲甲酯相關(guān)蛋白A抗體

紅根須腹 4--3-甲氧基-2- N-氧化物幽門螺旋桿抗體

康寧木霉 2-乙酰氧基-2,4-二氟苯乙酮葡萄糖

總狀毛霉 N,N’-二-（2-辛基十二烷基）-2,3,6,7-四溴-1,4,5,8-萘四羧二酰乳

蟲草屬 3-叔丁氧羰基氨基-1-甲叔丁酯蛋白激C結(jié)合蛋白1

四川散斑殼 9,10-二基蒽內(nèi)臟脂肪特異性絲蛋白抑制劑

馬賽對(duì)甲叔丁酯血管緊張轉(zhuǎn)化

白地霉 4-辛氧基苯端粒

糙皮側(cè)耳 5-溴-3-(三氟甲基)-2-基吡啶膳食纖維

釀酒酵母 1-BOC-哌-2-甲膜聯(lián)蛋白-V
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)