肌纖維染色液(Puchtler鞣酸偶氮熒光桃紅法)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X9978

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：肌纖維染色液(Puchtler鞣酸偶氮熒光桃紅法)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：5×50ml

貨號：FS-X9978

產(chǎn)品介紹:

用途：

肌纖維染色，可區(qū)分肌纖維和膠原纖維

注意事項(xiàng)：

肌纖維和肌上皮細(xì)胞呈玫瑰紅色，膠原纖維呈黃色。

儲存條件：4℃，避光，12個月

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

巨大芽胞桿菌血小板活化因子CTR9抗體Human USP18(Ubiquitin Specific Peptidase18) 人游離甲狀腺(FT4)免疫試劑盒

炭彎曲嗜菌前列環(huán)合成抗體Human HDAC(Histone deacetylase) 人游離睪(F-TESTO)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌軟骨寡聚基質(zhì)蛋白抗體Human NAG(Neutral alpha-glucosidase) 人游離蛋白S(FP-S)免疫試劑盒

根瘤菌T淋巴CD1A抗體Human SSC5D(Soluble scavenger receptor cysteine-rich domain-containing protein SSC5D) 人游離雌三(FE3)免疫試劑盒

副豬嗜血桿菌磷化周期B1抗體Human DEFB105(Beta-defensin 105) 人游離β絨毛膜促性腺激(f-βhCG)免疫試劑盒

水黏結(jié)桿菌胞漿型磷脂A2抗體Human Foxj1(Forkhead box protein J1) 人幽門螺旋菌抗體(IgA)免疫試劑盒

灰略紅鏈霉菌膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白抗體Human IS(serum indoxyl sulfate) 人幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)免疫試劑盒

細(xì)鏈格孢緊密連接蛋白6抗體Human HOXB7(Homeobox protein Hox-B7) 人幽門螺旋桿菌IgM(Hp-IgM)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌磷化緊密連接蛋白6抗體Human HSPBAP1(HSPB1-associated protein 1) 人硬骨(SOST)免疫試劑盒

藤倉赤霉著絲粒蛋白T抗體Human IL-17RA(Interleukin 17 receptor A) 人印度猬因子(IHH) 免疫試劑盒

嗜麥芽黃單胞菌染色體相關(guān)蛋白2抗體Human HDAC6(Histone deacetylase 6) 人隱熱蛋白(NLRP3/C1orf7/CIAS1/NALP3/PYPAF1)免疫試劑盒

羅倫隱球酵母著絲粒蛋白P抗體Human ABCA13(ATP Binding Cassette Transporter A13) 人2,3-雙加氧(IDO)免疫試劑盒

大腸桿菌分裂周期相關(guān)蛋白5抗體Human USP18(Ubiquitin Specific Peptidase18) 人(INDO)自身抗體免疫試劑盒

黑曲霉染色體相關(guān)蛋白2抗體Human CD19(Cluster of Differentiation 19)人音猬因子N端(Shh-N)免疫試劑盒

無氧芽孢桿菌周期調(diào)控因子10抗體Human HDAC(Histone deacetylase) 人音猬因子(SHH)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌中心體蛋白97kDa抗體Human NAG(Neutral alpha-glucosidase) 人抑制β-B(Inhbb)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRIgγ3鏈C區(qū)試劑盒7-O-基白楊

芽孢桿菌Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRICOS配體試劑盒巨大戟

多殺性巴氏桿菌Pasteurella│multocida 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRICE蛋白激活因子試劑盒25-氧基-原人參三
肌纖維染色液(Puchtler鞣酸偶氮熒光桃紅法)大腸埃希氏桿 Sulforhodamine 101木糖基轉(zhuǎn)移

解淀粉芽孢桿 Gabapentin HCl巖藻糖糖基轉(zhuǎn)移

根癌土壤桿 Bradykinin triacetate salt生長因子受體結(jié)合蛋白2

擬枝孢鐮孢 α－內(nèi)啡肽蛋白激活亞基1

葡萄汁有孢漢遜酵母 NeurotensinEB病核抗原1

復(fù)輪生小克銀漢霉 Trichostatin AEB病核抗原2

廣島鏈霉 Ala-Ala-AlaEB病衣殼抗原

釀酒酵母 α-Melanocyte stimulating hormone轉(zhuǎn)谷氨酰2

尖孢鐮孢 BRL-54443TM4SF19

平菇 Laropipran-IGFBP-4

密歇根棍狀桿標(biāo)記亞種 Gabexate MesylateCT-IGFBP-4

戊糖片球 WZ811TNFSF10

Priceomyces sp. 1-Pyrenebutyric hydrazideTRIM55蛋白

阿姆斯特丹曲霉 Nutlin-3紅胰島受體酪蛋白激

枯草芽孢桿枯草亞種 URB597二羥基激2
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)