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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> BRAFV600E抑制劑(PLX8394)
貨號(hào) | FS-X10418 |
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產(chǎn)品介紹:
英文名稱:PLX8394 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg PLX8394是一種有效的,選擇性的Raf抑制劑,能夠抑制BRAFV600E的活性,IC50值約為5nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1393466-87-9 純度:98.44% 分子量:542.53 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
英文名稱:PLX8394
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10418
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
金乳牛肝菌豬繁殖與呼吸綜合征/豬藍(lán)耳病病抗體Anti-BAG3 Antibodyγ肽(Pγ)
美澳型核果褐腐病菌凋亡相關(guān)蛋白10抗體Anti-BAG1 Antibodyγ谷酰轉(zhuǎn)移(GGT)
美澳型核果褐腐病菌鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激磷抗體Anti-BAG1 Antibodyγ-谷酰環(huán)化轉(zhuǎn)移(GGCT)
門多薩假單胞菌絲/蘇蛋白激PIM3抗體Anti-BAG5 Antibodyγ谷酰半胱合成(γ-ECS)
蠟樣芽孢桿菌組蛋白精甲基轉(zhuǎn)移5抗體Anti-BAG5 Antibodyγ谷-半胱合成(γ-GCS)
熱帶假絲酵母原鈣粘附蛋白11X抗體Anti-BAG3 Antibodyγ干擾誘導(dǎo)蛋白16/p16(IFI16/p16)
粉紅聚端孢霉原鈣粘附蛋白11Y抗體Anti-BAK(BAK1) Antibodyγ干擾誘導(dǎo)單核因子(MIGF/CXCL9)
暗褐色毛霉原鈣粘附蛋白12/血管內(nèi)皮鈣粘蛋白2抗體Anti-BAG6 Antibodyγ干擾受體(IFN-γR)
枯草芽孢桿菌原鈣粘附蛋白17抗體Anti-BAP1 Antibodyγ干擾(IFN-γ)
三葉草根瘤菌原鈣粘附蛋白1抗體Anti-BAX Antibodyγ干擾(IFNγ)
杰丁畢赤酵母原鈣粘附蛋白α1抗體Anti-BAK1 Antibodyγ分泌激活蛋白(PION)
深紅原鈣粘附蛋白α3抗體Anti-BAMBI Antibodyγ基丁(GABA)
金龜子綠僵菌原鈣粘附蛋白α4抗體Anti-BAX Antibodyβ-轉(zhuǎn)導(dǎo)重復(fù)序列包含蛋白(BTRC)
短乳桿菌原鈣粘附蛋白α5抗體Anti-BAX Antibodyβ抑制蛋白2(ARRB2)
發(fā)酵假絲酵母原鈣粘附蛋白α9抗體Anti-BAX Antibodyβ血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)
側(cè)毛殼原鈣粘附蛋白α7抗體Anti-BAX Antibodyβ血小板球蛋白(β-TG)
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品,還原型
巴斯德畢赤酵母Pichia│pastoris 質(zhì)量規(guī)格:純度大于98%,BR
干酪乳桿菌假植物亞種Lactobacillus│casei subsp .pseudoplantarum 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
BRAFV600E抑制劑(PLX8394)茶樹(shù)菇 3--4-(三氟甲基)苯絲織蛋白1
綠木霉 2-羥基三氟甲苯氨基己糖
托姆青霉 環(huán)己基色P4502B1
松口蘑 6-吡啶-3-有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體2
蒙氏假單胞 三(4-嗎啉基)氧化膦直接高密度脂蛋白膽固
乳鏈球 2-氟-6-甲苯尿肌酐
德氏乳桿 3,4-己二酮微管相關(guān)蛋白輕鏈3
峽灣嗜冷桿 (S)-(-)-2,2′,6,6′-四甲氧基-4,4′-雙(二(3,5-二甲苯基)膦-3,3′-聯(lián)吡Adropin蛋白
茄鐮孢 (R)-(+)-2,2′,6,6′-四甲氧基-4,4′-雙(二(3,5-二甲苯基)膦-3,3′-聯(lián)吡磷化信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子3
酒紅鏈霉 碳乙烯亞乙酯活性氮簇
云芝栓孔(變色栓) 二苯基酐膠原吡啶交聯(lián)
靈芝屬 胡椒脫氧膠原吡啶交聯(lián)
銅綠假單胞 環(huán)丁抗N-甲基-D-天冬受體1
泰國(guó)葡糖桿 2-苯并咪唑基乙抗N-甲基-D-天冬受體2B
中慢生華癸根瘤 2-苯二甲酰亞氨基乙烷磺酰軟骨846
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