實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

PCR技術(shù)的定量原理：
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擴(kuò)增曲線
在Real-time qPCR中，對整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于液中。
PCR檢測試劑盒：
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時(shí)將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 小鼠腹水瘤；S-180 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Klebsiella pneumoniae (Schroeter) Trevisan名稱: 雞胚成纖維（自發(fā)轉(zhuǎn)化）；UMNSAH/DF1 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

Sarcinomyces crustaceus Lindner, anamorph名稱: 猴腎；VeroIgCD4 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Malbranchea graminicola Sigler et Lacey名稱: 猴腎；veroIgRCD4- MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 雜交瘤（B類）；Z1510A2G6A2F8 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Staphylococcus simulans Kloos and Schleifer名稱: 雜交瘤（B類）；Z1510C6D10F4G6 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Acremonium recifei (Leao et Lobo) Gams, ana ..名稱: 雜交瘤（B類）；Z153A2A5B3A12 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Homo sapiens, human名稱: 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干；PUMC-mips-A4 KO-DMEM+15%FBS+103U/mlLIF+2mML-Glu+1%NEAA+0.1Mβ-Mer

Homo sapiens, human名稱: 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干；PUMC-mips-A2 KO-DMEM+15%FBS+103U/mlLIF+2mML-Glu+1%NEAA+0.1Mβ-Mer

Conidiobolus adiaeretus Drechsler, teleomor ..名稱: 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干；PUMC-mips-A5 KO-DMEM+15%FBS+103U/mlLIF+2mML-Glu+1%NEAA+0.1Mβ-Mer

Cryptococcus terreus di Menna名稱: 雜交瘤（B類）；IB3C10H12A12G2H8F3 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干；PUMC-mips-B1 KO-DMEM+15%FBS+103U/mlLIF+2mML-Glu+1%NEAA+0.1Mβ-Mer

Streptomyces flavoviridis (Krasil'nikov) Pr ..名稱: 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干；PUMC-mips-B4 KO-DMEM+15%FBS+103U/mlLIF+2mML-Glu+1%NEAA+0.1Mβ-Mer

Dictyostelium brevicaule Vadell et Cavender名稱: 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干；PUMC-mips-C2 KO-DMEM+15%FBS+103U/mlLIF+2mML-Glu+1%NEAA+0.1Mβ-Mer

Colletotrichum lindemuthianum (Saccardo et ..名稱: 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干；PUMC-mips-B2 KO-DMEM+15%FBS+103U/mlLIF+2mML-Glu+1%NEAA+0.1Mβ-Mer

Pseudomonas sp.名稱: 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干；PUMC-mips-C4 KO-DMEM+15%FBS+103U/mlLIF+2mML-Glu+1%NEAA+0.1Mβ-Mer
新疆出血熱病毒核酸檢測試劑盒人抗麥膠蛋白/麥醇溶蛋白抗體(AGA)ELISA試劑盒SCCAgELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人抗腦組織抗體(ABAb)ELISA試劑盒sCD14ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人抗染色體抗體(anti-chromosomeAb)ELISA試劑盒sCD21ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人抗人絨毛膜促性腺激素抗體(AhCGAb)ELISA試劑盒sCD30ElisaKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人抗腮腺管抗體(anti-parotidductAb)ELISA試劑盒sCD30LELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人抗腎上腺皮質(zhì)抗體(AAA)ELISA試劑盒sCD30LELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人抗胃壁細(xì)胞抗體(AGPA/PCA)ELISA試劑盒sCD30LELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人抗中性粒細(xì)胞抗體(ANA)ELISA試劑盒sCD38ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。