實(shí)時(shí)熒光定量PCR：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對(duì)數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。
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參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：DNA擴(kuò)增試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：48T
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-P10763
產(chǎn)品分類：恒溫?cái)U(kuò)增法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
定量PCR方法：
a、競(jìng)爭(zhēng)法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中，待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增（其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記）。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段，而待測(cè)模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測(cè)定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí)，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度，以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn)，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。
PCR的反應(yīng)條件：
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小，設(shè)定25～30個(gè)循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會(huì)出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實(shí)驗(yàn)可2℃間隔進(jìn)行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時(shí)，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時(shí), 時(shí)間設(shè)定可稍長(zhǎng)一些。通常，Anneal溫度太高，有時(shí)會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時(shí)，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時(shí)間太短時(shí)，會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會(huì)有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時(shí)間太長(zhǎng)時(shí)，會(huì)出現(xiàn)Smear。
DSM23767T=CCTCCAB2010363T=MCCC1A06153T模式菌株: yes安全等級(jí): 1種屬: Microbacterium│sediminis沉積物/表層沉積物提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株；微生物/耐冷、耐熱、耐鹽微生物培養(yǎng)基: 221

蘇云金芽孢桿菌培養(yǎng)基: 141害蟲生物防治提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 28 定期移植法

 -1579℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

多殺性巴氏桿菌滅活疫苗和抗血清模式菌株: no肺疫豬提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2培養(yǎng)基: 56生長(zhǎng)條件: 37

大腸埃希氏菌病生活周期及病基因表達(dá)調(diào)控的研究模式菌株: noLB培養(yǎng)基提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 304生長(zhǎng)條件: 37℃

青霉菌培養(yǎng)基: 14模式菌株: no青蒿莖提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 25 定期移植法

白井盤多毛孢生長(zhǎng)條件: 25培養(yǎng)基: 14提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；定期移植法

印度洋大洋桿菌培養(yǎng)基: 471潛在的有機(jī)污染物降解菌/分離自多環(huán)芳烴(PAHs)富集菌群水樣/深海底層水樣提供形式: 凍干物模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 25℃ 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

鹽單胞菌1.海洋石油污染生物修復(fù); 2.生物活性物質(zhì)篩選模式菌株: no水樣/深層海水提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 821生長(zhǎng)條件: 25℃

 -1580℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

鏈霉菌培養(yǎng)基: 0012模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

蠟狀芽孢桿菌分類學(xué)及海洋微生物研模式菌株: no沉積物提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2培養(yǎng)基: 0223生長(zhǎng)條件: 30℃

芽孢桿菌培養(yǎng)基: 0223模式菌株: no泥樣提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 30℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

貝倫格葡萄座腔菌梨生專化型培養(yǎng)基: 14模式菌株: no富士蘋果枝干病?單個(gè)分生孢子分離菌株提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 25 定期移植法

短芽孢桿菌培養(yǎng)基: 2滇池磷沉積的研究鉆取滇池底泥提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 37℃ 真空冷凍干燥法；定期移植法

披發(fā)糖多孢菌培養(yǎng)基: CM0038生物轉(zhuǎn)化Pravastatin提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 28C 真空冷凍干燥

阿卡波糖MMP-9(matrix metalloproteinase 9)  基質(zhì)金屬蛋白酶-9抗原TNFAIP2  腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白2(TNFα-IP 2)抗體

阿卡波糖(標(biāo)準(zhǔn)品)MMP-10(matrix metalloproteinase 10)  基質(zhì)金屬蛋白酶-10抗原TNFAIP1  腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白1抗體

阿昔洛韋,無環(huán)鳥苷MPO peptide  髓過氧化物酶抗原TNF β  腫瘤壞死因子-β抗體

阿昔洛韋,無環(huán)鳥苷(標(biāo)準(zhǔn)品)MRP2 (multidrug resistance-associated protein2)  多藥耐藥相關(guān)蛋白2TNF alpha  腫瘤壞死因子-α/TNFα抗體

腺苷；腺嘌呤核苷MRP5/ABCC5(Multidrug Resistanec-Associated Protein 5)  多藥耐藥相關(guān)蛋白5抗原TNF alpha  腫瘤壞死因子-α/TNFα抗體

腺嘌呤核苷（腺苷）（標(biāo)準(zhǔn)品）MrpL28 (mitochondrial ribosomal protein L28)  線粒體核糖體蛋白L28(抗原)TMUB1  跨膜和泛素樣結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體

鹽阿地芬寧MLH1(Mutl homolog l gene)  錯(cuò)配修復(fù)蛋白1抗原TMS1/ASC  凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白ASC抗體

鹽阿地芬寧(標(biāo)準(zhǔn)品)MUC5AC/Mucin 5AC(Gastric Mucin M1)  胃粘液素抗原TMPRSS5  跨膜絲氨蛋白酶5抗體

醋阿拉瑞林/氨瑞林 MTNR1B/MTNR-1B(Melatonin receptor 1B)  褪黑素受體1B抗原TMPRSS4  膜型絲氨蛋白酶2抗體

阿侖磷鈉MLN(Motilin)peptide  胃動(dòng)素多肽TMIGD1  跨膜TMIGD1蛋白抗體
DNA擴(kuò)增試劑盒Moclobemide　嗎貝胺　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Moclobemide　嗎貝胺(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

AstragalosideIV　黃芪甲苷(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

AstragalosideIV　黃芪甲苷　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Nateglinide　那格列奈（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Nateglinide　那格列奈　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Nateglinide　那格列奈　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

"(-)scopolamineN-butylbromide"　丁東莨菪 　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Tannicacid　單寧,鞣,丹寧　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Maraviroc　馬拉韋若　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Revalor-H Trenboloneacetate　群勃龍醋酯　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Silibinin　水飛薊賓(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Silibinin　水飛薊賓　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Ezetimibe　依澤替米貝;依折麥布　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Ezetimibe　依澤替米貝;依折麥布(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR