偶氮熒光桃紅染色液-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9977

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱(chēng)：偶氮熒光桃紅染色液

英文名稱(chēng)：

產(chǎn)品規(guī)格：50ml

貨號(hào)：FS-X9977

產(chǎn)品介紹:

用途：

肌纖維染色，可區(qū)分肌纖維和膠原纖維

注意事項(xiàng)：

肌纖維和肌上皮細(xì)胞呈玫瑰紅色，膠原纖維呈黃色。

儲(chǔ)存條件：4℃，避光，12個(gè)月

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

Paucimonas lemoignei4號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框29抗體Human KCNA4(Potassium voltage-gated channel subfamily A member 4) 人孕激誘導(dǎo)阻斷因子(PIBF)免疫試劑盒

芽孢桿菌屬4號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框21抗體Human Protein NDRG3(N-myc downstream-regulated gene 3 protein) 人孕激/孕(PROG)免疫試劑盒

豇豆慢生根瘤菌C型凝集結(jié)構(gòu)域家族4成員C抗體Human P311(Neuronal protein 3.1) 人鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)蛋白(KLH)抗體(IgM)免疫試劑盒

嗜熱鏈球菌CD226抗體Human TIGAR(TP53-Inducible Glycolysis and Apoptosis Regulator) 人鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)蛋白(KLH)抗體(IgG)免疫試劑盒

新疆鹽地桿菌屬CD26抗體Human anti-CarP(anti-carbamylated protein) 人遠(yuǎn)端上游元件結(jié)合蛋白1(FUBP1)免疫試劑盒

桃色枝頂孢免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ/Fc γ RII a抗體Human ApoB48 人原纖維蛋白-1(FBN1)免疫試劑盒

腸桿菌屬緊密連接蛋白20抗體Human ABHD1 人原鈣黏1(PCDH1)免疫試劑盒

游動(dòng)球菌屬中心體蛋白135抗體Human EMP3(Epithelial membrane protein 3) 人1(PRM1)免疫試劑盒

膠孢半胱蛋白蛋白-7抗體Human ABL2 人誘導(dǎo)型一氧化氮合成(iNOS)免疫試劑盒

Herbaspirillum canariense鈣調(diào)節(jié)抗體（鈣調(diào)蛋白/鈣調(diào)）Human ABT1 人有絲分裂原活化蛋白激14(MAPK14)免疫試劑盒

檸檬假絲酵母1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框181抗體Human ABLIM1 人游離脂肪(FFA)免疫試劑盒

*杏葉斑鏈格孢Ⅰ型補(bǔ)體受體抗體（C3b/C4b受體抗體）Human ACADSB 人游離原卟啉(FEP)免疫試劑盒

青霉屬8型膠原/內(nèi)皮膠原蛋白抗體Human ABTB1 人游離血紅蛋白(f-Hb)免疫試劑盒

孟氏假單胞菌結(jié)合轉(zhuǎn)化激活因子CITED1抗體Human ACADVL 人游離狀腺原(Free-T3)免疫試劑盒

石面單胞菌色P450 2C9抗體Human ACBD3 人游離肉堿免疫試劑盒

摩洛哥芽孢桿菌色P450 2D6抗體Human ACAP1 人游離前列腺特異性抗原(fPSA)免疫試劑盒

教酒鏈霉菌Streptomyces│chartreusis 質(zhì)量規(guī)格：>70%,BSKI-67抗原試劑盒桔梗皂元

煙草Colletotrichum│tabacum 質(zhì)量規(guī)格：BR；溶液，Au在23.5-23.8%Jo1抗體/抗組酰tRNA合成抗體試劑盒焦袂康

: AS01資源名稱(chēng): 熱帶假絲酵母質(zhì)量規(guī)格：>96%,BRIV形膠原蛋白α3鏈試劑盒基當(dāng)藥寧
偶氮熒光桃紅染色液地中海中間根瘤 Fenretinide水蛭

霍氏腸桿 Nintedanib (BIBF 1120)類(lèi)缺陷病1抗體

嗜鹽動(dòng)性球 Kemptide acetate saltCD16分子

大腸埃希氏桿 dehydroepiandrosterone sulfate (sodium salt)層粘連蛋白α5

蟻巢傘屬 Brivanib Alaninate (BMS-582664)烯酰-CoA異構(gòu)

秦氏蜜環(huán) AS-604850磷張力蛋白同源物

紅緣擬層孔 Tozasertib2,4-二烯酰還原

Betaxolol成纖維生長(zhǎng)因子受體4

聚生殼 γ-Glu-Cys胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白樣1

葡萄座腔 Asunaprevir胎盤(pán)堿性磷

多鏈霉 Riociguat細(xì)小病B19-IgM抗體

黃曲霉 Rolipram無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員6

葡萄芽假絲酵母 β-內(nèi)啡肽,人甘露糖基轉(zhuǎn)移

葡紫紅菇 Apremilast鼠李糖基轉(zhuǎn)移

光滑青霉 Selumetinib (AZD6244)葡萄糖基轉(zhuǎn)移
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)