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貨號 | FS-X10933 |
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產(chǎn)品介紹:
SR-3677是高效的選擇性的ROCK-II抑制劑,IC50值為~3nM. 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1072959-67-1 純度:99.46% 分子量:408.45 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
中文名稱:ROCK-II抑制劑(SR-3677)
英文名稱:SR-3677
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10933
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
土壤貪噬菌人激動異構(gòu)/分裂MBBacillus licheniformis小鼠Toll樣受體9(TLR-9/CD289)
糞腸球菌人肌球蛋白輕鏈激Bacillus licheniformis小鼠鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)
葡萄座腔菌人硫轉(zhuǎn)移pi基因Bacillus licheniformis小鼠鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)
大腸埃希氏菌人S轉(zhuǎn)移Bacillus licheniformis小鼠生長激釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)
擬莖點霉屬人泛分解Bacillus licheniformis小鼠生長激釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)
假單胞菌人分泌型磷脂A2Bacillus licheniformis小鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲蛋白抑制劑(vaspin)
水生黃桿菌人泛連接Bacillus licheniformis小鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲蛋白抑制劑(vaspin)
裂褶菌 人肥大類Bacillus licheniformis小鼠溴脫氧核(BrdU)
栓菌人多巴色異構(gòu)Bacillus licheniformis小鼠溴脫氧核(BrdU)
李氏放線桿菌人泛結(jié)合Bacillus licheniformis小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)
pET28a人蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)Bacillus licheniformis小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)
蘇云金芽孢桿菌人胱天蛋白激活的脫氧核糖核Bacillus licheniformis小鼠α1微球蛋白(α1-MG)
蘇云金芽胞桿菌莫氏變種人γ谷酰半胱合成Bacillus licheniformis小鼠α1微球蛋白(α1-MG)
紡錘狀鏈霉菌人泛激活Bacillus licheniformis小鼠單核趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)
微桿菌人胃蛋白Bacillus licheniformis小鼠單核趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)
鮑姆木層孔菌人己糖激Bacillus licheniformis小鼠過氧化物體增殖物激活受體α(PPAR-α)
鋅指蛋白903抗體蟬花1-人角質(zhì)形成細胞
鋅指蛋白923抗體石耳貓腎細胞
鋅指蛋白297B抗體*土豆口蘑雞胚成纖維細胞
鋅指蛋白340抗體菊葉點霉人急性T淋巴細胞白血病細胞
ROCK-II抑制劑(SR-3677)谷棒桿 亞麻甲酯黑色
短桿狀馬賽 蘆薈多糖黑濃集
擬莖點 藏紅花二黃體生成
阿舒假囊酵母 大豆異黃酮混合功能氧化
釀酒酵母
球孢白僵 ?;蛆Z脫氧膽鈉鹽肌激
香菇(林研6號) 磺舒敏感性脂肪
仁果叢梗孢 瑞鮑迪甙B甲狀腺
亮白曲霉 毛旋花子K堿性磷
膠孢 毛花C結(jié)合珠蛋白
枯草芽孢桿 D-熒光鹽金屬硫蛋白
枯草芽孢桿 α-酮戊二精加壓
腸膜明串珠葡聚糖亞種 甘油三酯精
假單胞 杠柳元亮氨肽
孢小克銀漢霉輪生變種 高紫檀磷果糖激
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