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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>核酸檢測(cè)試劑盒>>熒光PCR法>> 50T黑龍江立克次體核酸檢測(cè)試劑盒
對(duì)蝦黃頭病病毒(YHV)核酸定性檢測(cè)試劑盒
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
產(chǎn)品名稱 | 分類 | 貨號(hào) |
黑龍江立克次體核酸檢測(cè)試劑盒 | 熒光PCR法 | FS-P9995 |
PCR技術(shù)的定量原理:?
擴(kuò)增曲線
在Real-time qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系,所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于液中。
PCR檢測(cè)試劑盒:
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中,按100g:3ml的比例加入Trizol試劑,嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol(按3ml/100mg組織,寧多勿少)置于玻璃勻漿器中勻漿后,冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中,4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中,室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol,振蕩15s,室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相,移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol,振搖,置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min,EP管底部可見(jiàn)白色沉淀物。
(9)棄上清,紙巾吸干,加入75%乙醇1ml,振搖,充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇,空氣干燥10min(可離心加快干燥,盡量吸盡離心液體)。
(12)半透明時(shí)將RNA溶于去核酸酶的水20ul中(可吹打混勻),-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度,所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳,顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
Epichloe brachyelytri Schardl et Leuchtmann名稱: 小鼠雜交瘤;IL-8 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 鼠B淋巴瘤;6A8/6F10/1A6 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
dried名稱: 小鼠雜交瘤;INHA(Inhibinalpha) RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 小鼠雜交瘤;InfluenzaBvirusNucleoprotein RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Neisseria meningitidis (Albrecht and Ghon) ..名稱: 小鼠雜交瘤;UC10-4F10-11 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 鼠B淋巴瘤;MR1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Moraxella catarrhalis (Frosch and Kolle) Bo ..名稱: 人前列腺癌;LNCaP1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Pseudomonas aeruginosa (Schroeter) Migula名稱: 人前列腺癌;LNCaP2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Verticillium lecanii (Zimmermann) Viegas, a ..名稱: 人癌;SK-BR-3[SKBR-3;SKBR3] McCoy's5AMedia(ModifiedwithTricine)10%FBS
Cochliobolus heterostrophus Drechsler, tele ..名稱: 人黑色瘤系;A375[A-375] DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
Rattus norvegicus, rat名稱: 人癌系;CWR22-RV1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Mus musculus breast; derived from metastati ..名稱: 艾氏腹水癌;EAC RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Homo sapiens, human名稱: 人肝癌;HCCLM3 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 小鼠癌;4T1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 昆蟲(chóng);Hi-five(BTI-TN-5B1-4) Grace'sInsectMedium(GIMw/oBSA,FCS,WholeEggUltrafiltrate)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 人癌;BT474 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
黑龍江立克次體核酸檢測(cè)試劑盒人免疫球蛋白j鏈(Ig-j)ELISA試劑盒RBP-4ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人果糖1,6二磷醛縮酶(FDA)ELISA試劑盒RBP-4ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人表面膜免疫球蛋白A(mIgA)ELISA試劑盒RBPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人免疫球蛋白輕鏈kappa抗體(κ-IgLC)ELISA試劑盒RBPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人多免疫球蛋白受體(poly-IgR)ELISA試劑盒RCAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人免疫球蛋白重鏈可變區(qū)(IgHV)ELISA試劑盒ReninELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人免疫球蛋白重鏈(IgH)ELISA試劑盒ResistinELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA試劑盒RFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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