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貨號 | FS-X10359 |
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產品介紹:
英文名稱:Entinostat 產品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg Entinostat是I型選擇性的HDAC抑制劑,作用于HDAC1,HDAC2和HDAC3,IC50分別為243nM,453nM和248nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:209783-80-2 別名:MS-275;SNDX-275 純度:98.29% 分子量:376.41 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
中文名稱:HDAC抑制劑(Entinostat)
英文名稱:Entinostat
產品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg
貨號:FS-X10359
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
鹽古桿菌黑色瘤相關抗原B3抗體Human NUCB2(Nucleobindin-2) 人抗人絨毛膜促性腺激抗體(AhCGAb)
布魯氏菌 生物Ⅱ型鋅指蛋白801抗體Human RLN3(Relaxin-3) 人抗染色體抗體(anti-chromosome Ab)
中性彎曲嗜菌NDUFS2抗體Human IL5RA(Interleukin-5 receptor) 人抗浦肯野抗體/抗Yo抗體(PCA-1/Yo)
產朊假絲酵母NDUFAF4抗體Human S100A16(Protein S100-A16) 人抗平滑肌抗體(ASMA)
黑木耳分化相關基因NDRG1抗體Human ELANE(Neutrophil elastase) 人抗皮膚抗體(ASA)
中慢生華癸根瘤菌神經降壓抗體Human RRM1(Ribonucleoside-diphosphate reductase large subunit) 人抗凝血抗體(aPT1/aPT2)
殺鮭氣單胞菌核受體輔助抑制因子2抗體Human PSG3(Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 3) 人抗凝血受體(ATR)
黃色短桿菌核仁磷蛋白抗體Human IL5RA(Interleukin-5 receptor) 人抗凝血III(AT III)
大腸埃希氏菌嗜中性粒胞漿因子4抗體Human NUCB2(Nucleobindin-2) 人抗凝血Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)
蘑菇輪枝孢磷化核因子NF-κB p65抗體Human S100A16(Protein S100-A16) 人抗凝血Ⅲ(ATⅢ)
*勝利油田熱微球菌磷化一氧化氮合成3(內皮型)抗體Human RLN3(Relaxin-3) 人抗釀酒酵母抗體(ASCA)
黑曲霉核抑制蛋白磷1抗體Human FABP4(Fatty acid-binding protein, adipocyte) 人抗內因子抗體(IFA)
異配囊接霉NCK銜接蛋白1抗體Human IL9(Interleukin-9) 人抗內皮抗體(AECA)
熱帶鹽水孢菌α-中連蛋白抗體Human RRM1(Ribonucleoside-diphosphate reductase large subunit) 人抗腦組織抗體(ABAb)
大腸桿菌核受體Rev-Erbα抗體Human LAMA1(Laminin subunit alpha-1) 人抗苗勒管激(AMH)
Wautersiella falsenii性受體NK-p44抗體Human PDGFRA(Alpha-type plaet-derived growth factor receptor) 人抗麥膠蛋白/麥溶蛋白抗體(AGA)
副溶血弧菌Vibrio│parahaemolyticus 質量規(guī)格:BR,4000u/g落新婦
假交替單胞菌Pseudoalteromonas│tetraodonis 質量規(guī)格:BR,100 U/mg
鹽單胞菌Halomonas│sp. 質量規(guī)格:BR,75U/MG鹽基葡萄糖
HDAC抑制劑(Entinostat)大腸埃希氏 4-溴苯IX
嗜假諾卡氏 4-芐氧基苯皮質
禾谷鐮孢* 4-叔丁基苯皮質酮;腎上腺酮
嗜乳桿 苯并噻吩-2-皮質抑
棒曲霉 4-(Boc-氨基)苯核磷化
枯草芽孢桿枯草亞種 4-(Boc-氨基)苯蘋果脫氫
Marisediminicola 2-聯(lián)苯破骨分化因子
黃絮鱗鵝膏 2-溴吡啶-3-脯羥化
環(huán)狀芽胞桿 6-溴吡啶-3-脯肽
孢小克銀漢霉 1,4-二(基硅烷基)苯葡萄糖-6-磷
褐球固氮 1,4-二(二甲基硅烷基)苯葡萄糖-6-磷脫氫
油菜核病 4-芐氧基-2-氟苯葡萄糖激
皮狀假絲酵母 3-聯(lián)苯葡萄糖氧化
糞腸球 3-芐氧基苯葡萄糖依賴性胰島釋放多肽
白地霉 2-芐氧基苯葡萄糖轉運蛋白4
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