Rac GTPase抑制劑-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10496

中文名稱：Rac GTPase抑制劑

英文名稱：NSC 23766 trihydrochloride

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

貨號：FS-X10496

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：NSC 23766 trihydrochloride

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

NSC23766trihydrochloride是特異性的Rac GTPase抑制劑，用于癌癥研究。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1177865-17-6

純度：99.78%

分子量：530.96

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

Acinetobacter soli Kim et al. 鋅指轉(zhuǎn)錄蛋白Sall1抗體Anti-GH1 Antibody腺A2b受體(ADORA2b)

擬枝孢鐮孢鋅指轉(zhuǎn)錄蛋白Sall4抗體Anti-GFRA1 Antibody腺A2a受體(ADORA2a)

魯考弗美奇酵母轉(zhuǎn)錄因子SOX17抗體Anti-GH1 Antibody線粒體轉(zhuǎn)錄因子A(TFAM)

蜥蜴纖細芽孢桿菌溴化太林相關(guān)蛋白2抗體Anti-GH1 Antibody線粒體乙脫氫(ALDM)

濕鏈霉菌S100鈣結(jié)合蛋白A8抗體Anti-GHR Antibody線粒體外膜轉(zhuǎn)位70A(TOMM70A)

黃曲霉唾液結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集抗體Anti-GILT/IFI30 Antibody線粒體鐵蛋白(MFRN)

冷溫木拉克酵母唾液結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集1抗體Anti-GHR Antibody線粒體鐵蛋白(FTMT)

枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)錄因子SP3抗體Anti-GILT/IFI30 Antibody線粒體融合2(MFN2)

香菇轉(zhuǎn)錄因子SP6抗體Anti-GIP Antibody線粒體融合1(MFN1)

PaenibacillusSPOP蛋白抗體Anti-GIP Antibody線粒體解偶聯(lián)蛋白2(UCP2)

污黑腐皮殼鈉離子/?；悄懝厕D(zhuǎn)運蛋白抗體Anti-GJA1 Antibody線粒體解偶聯(lián)蛋白1(UCP1)

糖化酵母生長抑14抗體Anti-GJA4 Antibody線粒體肌激1B(CKMT1B)

根白蟻傘碳氫鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白4-A4抗體Anti-GJA3 Antibody線粒體肌激1A(CKMT1A)

匍枝根霉原變種肺表面活性蛋白D抗體Anti-GJA1 Antibody線粒體甘油-3-磷酰基轉(zhuǎn)移(GPAM)

斷裂諾卡氏菌血影蛋白A鏈紅型抗體Anti-GJB1 Antibody線粒體超氧化物歧化(SOD2)

蕈狀芽孢桿菌分選連接蛋白5抗體Anti-GJA5 Antibody線粒體GTP1(MTG1)

抑基因SSDP2抗體刺囊毛霉人支氣管平滑肌細胞

鯊烯環(huán)氧抗體休哈塔假絲酵母休哈塔亞種人直腸平滑肌細胞

信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5b抗體棘孢木霉人小腸平滑肌細胞

同源轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白Sin3A抗體長枝木霉人結(jié)腸平滑肌細胞
Rac GTPase抑制劑果生鏈核盤 2,5-二溴苯磺酰脂聯(lián)

膠凍樣類芽孢桿 2-異丁叔丁酯羥甲基戊二單酰

鴨星狀病 3-氟-4-(三氟甲基)血清淀粉樣蛋白A

弗里克塞爾湖黃桿 3,4-環(huán)氧環(huán)己基-3,4-環(huán)氧環(huán)己酯超敏C反應(yīng)蛋白

產(chǎn)黃纖維單胞乙基化鎂甲狀腺微粒體抗體

果蔬汁 op'-DDT、六六六磺銀氧化三

尖孢鐮刀化耐爾藍6-羥基硫褪黑

黃硬皮馬勃 4-羥基色C氧化

腸膜明串珠 6-硝基-2,3-二羥基喹喔啉琥珀脫氫

Corallococcus sp. 脲基三乙氧基硅烷三磷腺

畢赤酵母 1, 2-雙（二環(huán)己基磷基）-乙烷DNA甲基轉(zhuǎn)移3A

呂氏泰勒蟲（渭源株） 4-巰基苯DNA甲基轉(zhuǎn)移3B

孟氏假單胞 3,3'-二羥基聯(lián)苯胰高血糖

默氏利斯特氏 4-乙氧基肉桂乳脫氫

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