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當前位置：上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學試劑>>抑制劑激活劑>> PI3K/mTOR抑制劑(GNE-317)
| 貨號 | FS-X10931 |
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英文名稱：GNE-317
產品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號：FS-X10931
產品介紹:
GNE-317是一種PI3K/mTOR抑制劑，能夠穿過血腦屏障(BBB)。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ 號：1394076-92-6 純度：98.46% 分子量：414.48 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
根瘤菌人縮Bacillus coagulans小鼠白介2受體(IL-2R)
松鼠葡萄球菌人L-乳脫氫Bacillus coagulans小鼠腎上腺髓質(ADM)
曲霉人性神經鞘磷脂Bacillus coagulans小鼠腎上腺髓質(ADM)
綠色木霉人花生四烯5脂加氧Bacillus coagulans小鼠可溶性瘦受體(sLR)
草假單胞菌人5脂加氧Bacillus cohnii小鼠可溶性瘦受體(sLR)
黑曲霉人腺環(huán)化1Paenibacillus ehimensis小鼠β內啡肽受體(β-EPR)
貓埃菲比體人可溶性腺環(huán)化Bacillus diffusus小鼠β內啡肽受體(β-EPR)
德爾布有孢酵母人鳥脫羧Bacillus firmus小鼠肝脂(HL)
中華游動球菌人蛋白酪激Bacillus firmus小鼠肝脂(HL)
羊邊蟲（綿羊無漿體—承德株）人蛋白酪磷Bacillus firmus小鼠乙型肝炎核心抗體(HBcAb)
產短桿菌人腫瘤壞死因子α轉化Bacillus firmus小鼠乙型肝炎核心抗體(HBcAb)
枯草芽孢桿菌人多形核白彈性蛋白Bacillus firmus小鼠乙型肝炎e抗體(HBeAb)
木蹄層孔菌人尿激型纖溶原激活物Bacillus firmus小鼠乙型肝炎e抗體(HBeAb)
平菇人激肽釋放8Bacillus fusiformis小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)
豬鏈球菌人激肽釋放6Bacillus flexus小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)
平菇人果糖1,6二磷縮Bacillus fusiformis小鼠乙型肝炎表面抗體(HBsAb)
原癌基因Yes相關蛋白1抗體*亮葉耳環(huán)根瘤菌人外周血淋巴細胞系
相關蛋白2抗體轉錄因子YY1結合蛋白1抗體大花褶傘人張氏肝細胞
鋅指蛋白BED5抗體暗灰鏈霉菌腺病毒轉化的人胚腎細胞
宮頸癌抑制蛋白4抗體狹檐薄孔菌血管平滑肌細胞
PI3K/mTOR抑制劑(GNE-317)短小芽孢桿 碳鋇補體蛋白3
香栓孔 三氧化銻補體蛋白4
構巢曲霉 N-乙酰苯肼超敏C反應蛋白
煙色血革 硫鈦超氧化物歧化
硬結節(jié)桿 硫鈰垂體腺環(huán)化激活肽
桔橙鏈霉 氧化鋯雌二
黃曲霉 鉛粉雌
巴氏醋桿 十一烯雌受體
大腸埃希 草促甲狀腺
發(fā)酵乳桿* 硬脂鋅促甲狀腺釋放
葡萄座腔 乙鋅促卵泡
氧化節(jié)桿 磷二氫鋅促腎上皮質釋放
白色假絲酵母 磷鋅促腎上腺皮質
植物乳桿 堿式碳鋅促性腺釋放
膠孢 氧化鋅催產
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