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貨號	FS-X10950

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：PRMT4和PRMT6雙重抑制劑(MS049)

英文名稱：MS049

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10950

產(chǎn)品介紹:

MS049是一個強的，有選擇性的，有細胞活性的PRMT4和PRMT6雙重抑制劑，IC50分別是34nM和43nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1502816-23-0

純度：98.0%

分子量：248.36

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

黑曲霉人上皮中性?；罨?/span>78Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)

檸條根瘤菌人維生CBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠克拉拉蛋白(CC16)

葡萄枯萎病菌人維生B6Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠克拉拉蛋白(CC16)

冷溫木拉克酵母人可溶性P選擇Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β半乳糖(βGAL)

少根根霉人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子1Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β半乳糖(βGAL)

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石楠盤多毛孢人維生K1Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠腎上腺(EPI)

酒紅鏈霉菌人維生B12Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β甘露糖(β Manase)

大腸埃希氏菌人維生D3Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β甘露糖(β Manase)

東方伊薩酵母人維生D2Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠髓過氧化物特異性抗中性粒胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)

運動節(jié)桿菌人維生EBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠髓過氧化物特異性抗中性粒胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)

栗疫菌人維生ABacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β內(nèi)酰抑制劑(BLI)

磚紅鏈霉菌人鳥交換因子Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β內(nèi)酰抑制劑(BLI)

蒙地曲霉人維生D受體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠一氧化氮(NO)

枯草芽孢桿菌人性休克綜合征1Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠一氧化氮(NO)

淡水噬冷菌人金葡菌腸Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β萘(β-Nph)

鋅指蛋白ZBTB12抗體脆泊氏孔菌轉(zhuǎn)PYTL基因小鼠睪丸支持細胞

鋅指蛋白924抗體粗柄蘑菇人胚胎心臟成纖維樣細胞

鋅指蛋白297抗體杯傘正常人胰管上皮細胞

鋅指蛋白23抗體斜蓋傘中國地鼠卵巢細胞-木糖基轉(zhuǎn)移I缺陷型
PRMT4和PRMT6雙重抑制劑(MS049)紫杉薄孔二苯烷肉堿棕櫚?；D(zhuǎn)移1α

擬青霉季戊四腺環(huán)化

擬莖點霉四氫糠轉(zhuǎn)甲狀腺蛋白

鴨疫里氏桿透胰凝乳蛋白

白被黑蛋巢 1-辛膠原吡啶交聯(lián)

球毛殼正庚雙A

枯草芽孢桿環(huán)己白三烯B4

平菇十六葉黃

鐮刀十八胡蘿卜

蘇云金芽孢桿肯尼亞亞種 2-壬二酰

黑曲霉 1-壬胰凝乳蛋白

鏈格孢苯甲游離轉(zhuǎn)甲狀腺蛋白

波羅的海西瓦氏 3-苯肉堿脂酰轉(zhuǎn)移

曲霉 2-苯乙色P450 19A1B

*匍枝根霉 2,4,6-基吡啶S轉(zhuǎn)移
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)