GSK-3β抑制劑(CP21R7)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X11038

產(chǎn)品介紹:

CP21R7是一種有效的GSK-3β抑制劑，IC50值為1.8nM；同時可抑制PKCα，IC50值為1900nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：125314-13-8

別名：CP21

分子量：317.34

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

中文名稱：GSK-3β抑制劑(CP21R7)

英文名稱：CP21R7

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg

貨號：FS-X11038

實(shí)驗(yàn)報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

假單胞菌Lactobacillus murinus大鼠免疫球蛋白M(IgM)

根瘤菌Halomonas aquamarina大鼠內(nèi)皮抑(ES)

根霉Rhizobium leguminosarum大鼠內(nèi)皮抑(ES)

雞腸球菌Bradyrhizobium japonicum大鼠腦鈉/腦鈉尿肽(BNP)

黃桿菌Enterococcus durans大鼠腦鈉/腦鈉尿肽(BNP)

炭疽芽孢桿菌Enterococcus durans大鼠前列腺E2(PGE2)

哈茨木霉Enterococcus faecium大鼠前列腺E2(PGE2)

中慢生華癸根瘤菌Enterococcus durans大鼠神經(jīng)特異性烯化(NSE)

枯草芽孢桿菌Proteus hauseri大鼠神經(jīng)特異性烯化(NSE)

蒼白枝孢Corynebacterium diphtheriae大鼠間粘附分子2(ICAM-2/CD2)

勝利油田鹽單胞菌Clostridium thermocellum大鼠間粘附分子2(ICAM-2/CD2)

枯草芽孢桿菌Clostridium thermocellum大鼠間粘附分子3(ICAM-3/CD50)

聚貪噬菌Clostridium thermocellum大鼠間粘附分子3(ICAM-3/CD50)

枯草芽胞桿菌Rhodopseudomonas palustris大鼠纖溶原激活物抑制因子1(PAI-1)

解淀粉芽孢桿菌Rhodococcus rhodochrous大鼠纖溶原激活物抑制因子1(PAI-1)

摩氏變形菌Rhodopseudomonas palustris大鼠纖溶原激活物抑制因子(PAI)

ras癌基因家族Rab5蛋白抗體棘托竹蓀甘蔗鐮孢菌

視黃結(jié)合蛋白4抗體白鬼筆橄欖網(wǎng)狀鏈霉菌

腎/血管緊張形成Ren1抗體白黃側(cè)耳(姬菇)旱地小單孢菌

核受體RXRβ抗體蛹蟲草礪灰鏈霉菌康定變種
GSK-3β抑制劑(CP21R7)根瘤 D-纖維二糖

黃傘七葉

釀酒酵母氨

釀酒酵母異黃腐

草莓蛇眼小球殼

聚生殼大蒜

釀酒酵母十九

粉紅粘帚霉月桂

腐皮鐮孢鹽利多

棕灰口蘑 L-硒代胱

韓國康氏十七

釀酒酵母異噁酰草

放射形根瘤皮樹脂

安絡(luò)小皮傘* 表丁香脂

聚生殼間羥基

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