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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> RAF/MEK雙重抑制劑(Ro 5126766)
貨號(hào) | FS-X10948 |
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英文名稱:Ro 5126766
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10948
產(chǎn)品介紹:
Ro5126766(CH5126766)是一種強(qiáng)效的選擇性雙重RAF/MEK抑制劑,抑制SK-MEL-28,SK-MEL-2,MIAPACA-2,和SW480細(xì)胞系中,IC50值分別為為65,28,40,和46nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):946128-88-7 別名:CH5126766 純度:98.0% 分子量:471.46 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
蘋(píng)果盤二孢人促有絲分裂因子Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠補(bǔ)體蛋白4(C4)
壞損尾孢人轉(zhuǎn)錄因子抗體-1Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠腎(Renin)
樟疫霉人抗鼠抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠腎(Renin)
紫穗槐根瘤菌人鈣離子通道抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠α2抗纖溶(α2-AP)
黑木耳人溴脫氧核Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠α2抗纖溶(α2-AP)
氏假單胞菌人纖維母表面抗原Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠α2纖溶抑制物(α2-PI)
薛瓦酵母人分泌性白蛋白抑制因子Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠α2纖溶抑制物(α2-PI)
擬青霉人阿黑皮原Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠泛蛋白(Ub)
亞螺毛殼人不對(duì)稱二甲基精Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠泛蛋白(Ub)
熒光假單胞人血清/血清Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠αL艾杜糖(IDUA)
褐環(huán)粘蓋牛肝菌人Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠αL艾杜糖(IDUA)
昆明新鞘菌人α突觸核蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠αN已?;咸?αNAG)
毛紫褐鏈霉菌人糖鏈抗原19-9Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠αN已酰基葡糖(αNAG)
蘇云金芽孢桿菌松蠋亞種人水蛭Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠α甘露糖(α Manase)
毛柄金錢菌(金針菇)人Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠α甘露糖(α Manase)
擬青霉人上皮特異性抗原Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)
鋅指蛋白431抗體沙氏倚囊霉山羊皮膚細(xì)胞
鋅指蛋白185抗體芬芳鐮刀菌樹(shù)鼩胎肺成纖維樣細(xì)胞
鋅結(jié)合乙脫氫結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體馬勃小鼠小腸平滑肌細(xì)胞
鋅指蛋白909抗體費(fèi)氏根瘤菌人胸腺激缺陷型細(xì)胞
RAF/MEK雙重抑制劑(Ro 5126766)大腸埃希氏 鈉晚期糖基化終末產(chǎn)物
彎孢 硫非酯化脂肪
微紫青霉 磷三苯酯胃蛋白
粉紅單端孢 4-叔丁基茴香碳酐
大豆慢生根瘤 磷酯17β-羥基甾體脫氫1
Albidiferax 磷三乙酯Ⅱ型膠原
海床游動(dòng)微 亞磷三丁酯I型膠原蛋白抗體
黑葡萄穗霉 DL-苯己烯雌
聚生殼 三正丁酯胱硫β-合成
大腸埃希氏 DL-色蛋合
普通紅色桿 肉豆蔻異酯甜菜堿同型半胱甲基轉(zhuǎn)移
喜土毛束霉 油甘油酯乙酰酯
芽植單胞屬 三乙甘油酯S轉(zhuǎn)移
地羅河桿 DL-纈C反應(yīng)蛋白
香菇 油乙酯造血器官壞死病
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