RAF/MEK雙重抑制劑(Ro 5126766)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10948

中文名稱：RAF/MEK雙重抑制劑(Ro 5126766)

英文名稱：Ro 5126766

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10948

產(chǎn)品介紹:

Ro5126766(CH5126766)是一種強效的選擇性雙重RAF/MEK抑制劑,抑制SK-MEL-28,SK-MEL-2,MIAPACA-2,和SW480細胞系中,IC50值分別為為65,28,40,和46nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：946128-88-7

別名：CH5126766

純度：98.0%

分子量：471.46

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

蘋果盤二孢人促有絲分裂因子Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠補體蛋白4(C4)

壞損尾孢人轉錄因子抗體-1Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠腎(Renin)

樟疫霉人抗鼠抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠腎(Renin)

紫穗槐根瘤菌人鈣離子通道抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠α2抗纖溶(α2-AP)

黑木耳人溴脫氧核Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠α2抗纖溶(α2-AP)

氏假單胞菌人纖維母表面抗原Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠α2纖溶抑制物(α2-PI)

薛瓦酵母人分泌性白蛋白抑制因子Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠α2纖溶抑制物(α2-PI)

擬青霉人阿黑皮原Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠泛蛋白(Ub)

亞螺毛殼人不對稱二甲基精Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠泛蛋白(Ub)

熒光假單胞人血清/血清Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠αL艾杜糖(IDUA)

褐環(huán)粘蓋牛肝菌人Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠αL艾杜糖(IDUA)

昆明新鞘菌人α突觸核蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠αN已?；咸?αNAG)

毛紫褐鏈霉菌人糖鏈抗原19-9Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠αN已酰基葡糖(αNAG)

蘇云金芽孢桿菌松蠋亞種人水蛭Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠α甘露糖(α Manase)

毛柄金錢菌(金針菇)人Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠α甘露糖(α Manase)

擬青霉人上皮特異性抗原Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)

鋅指蛋白431抗體沙氏倚囊霉山羊皮膚細胞

鋅指蛋白185抗體芬芳鐮刀菌樹鼩胎肺成纖維樣細胞

鋅結合乙脫氫結構域蛋白2抗體馬勃小鼠小腸平滑肌細胞

鋅指蛋白909抗體費氏根瘤菌人胸腺激缺陷型細胞
RAF/MEK雙重抑制劑(Ro 5126766)大腸埃希氏鈉晚期糖基化終末產(chǎn)物

彎孢硫非酯化脂肪

微紫青霉磷三苯酯胃蛋白

粉紅單端孢 4-叔丁基茴香碳酐

大豆慢生根瘤磷酯17β-羥基甾體脫氫1

Albidiferax 磷三乙酯Ⅱ型膠原

海床游動微亞磷三丁酯I型膠原蛋白抗體

黑葡萄穗霉 DL-苯己烯雌

聚生殼三正丁酯胱硫β-合成

大腸埃希氏 DL-色蛋合

普通紅色桿肉豆蔻異酯甜菜堿同型半胱甲基轉移

喜土毛束霉油甘油酯乙酰酯

芽植單胞屬三乙甘油酯S轉移

地羅河桿 DL-纈C反應蛋白

香菇油乙酯造血器官壞死病

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