實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

PCR技術(shù)的定量原理：
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擴(kuò)增曲線
在Real-time qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于液中。
PCR檢測(cè)試劑盒：
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時(shí)將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
出芽短梗霉培養(yǎng)基: 513近海酵母沉積物/表層沉積物提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法

IFO14531模式菌株模式菌株: yes種屬: Rhodococcus globerulus提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: ISP-2培養(yǎng)基：酵母提取物 4.0 g,麥芽提取物 10.0 g,葡萄糖 4.0 g,瓊脂 15.0 g,蒸餾水 1.0 L,pH7.3。121℃，15分鐘滅菌。生長(zhǎng)條件: 28℃，好氧

 -1563℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

海原桿菌培養(yǎng)基: 246模式菌株: no鹽田提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 37℃ 真空冷凍干燥法

 A210培養(yǎng)基: 0091模式菌株: no種屬: Streptomyces│sp.提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

 ivcas7.00690模式菌株: no安全等級(jí): 1種屬: Bacillus│thuringiensis土壤提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: 0002生長(zhǎng)條件: 30℃

腐質(zhì)霉屬活性物質(zhì)；退行性疾病模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: CM0018生長(zhǎng)條件: 26C

球孢白僵菌害蟲生物防治模式菌株: no馬尾松毛蟲提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 14生長(zhǎng)條件: 25

銅綠假單胞菌生長(zhǎng)條件: 37℃培養(yǎng)基: CM0002提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

 -1564℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

 AS1.16殺鱗翅目昆蟲模式菌株: no種屬: Bacillus thuringiensis Berliner提供形式: 凍干管安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。生長(zhǎng)條件: 30℃，好氧。

鰒發(fā)光桿菌生物性物質(zhì)檢測(cè)、生物發(fā)光教學(xué)模式菌株: no海水提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 524生長(zhǎng)條件: 25℃

致黃假單孢菌培養(yǎng)基: 33模式菌株: no水稻葉圍提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 28℃ 真空冷凍干燥法

膠孢培養(yǎng)基: 14模式菌株: no果實(shí)提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 26-28 定期移植法

吉氏海桿菌潛在的有機(jī)污染物降解菌/分離自石油富集菌群模式菌株: no巖石/海底巖石提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 1001生長(zhǎng)條件: 25℃

熱栗色鏈霉菌生長(zhǎng)條件: 50℃培養(yǎng)基: 0012提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

川續(xù)斷皂苷VI；木通皂苷DIntegrin alpha 1  整合素α1抗原Transferrin receptor  轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體

芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷;大波斯菊苷Integrin Alpha4 Beta7/LPAM-1 (Lymphocyte Peyer’s patch Adhesion Molecule 1/Integrin alpha4,beta7)  整合素α4β7抗原Transferrin  轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體

遼東楤木皂苷VIntegrin AlphaE2/CD103  整合素αE2抗原Transcription factor 25/Nulp1  核轉(zhuǎn)錄因子25抗體

遼東楤木皂苷XENPP3/CD203c(ectonucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase 3)  ENPP3抗原Transaldolase 1  轉(zhuǎn)酶抗體

遼東楤木皂苷VIIIQGAP1  支架蛋白抗原TRAK1  驅(qū)動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白1抗體

阿魏乙酯IRF-1(Interferon regulatory factor-1)  干擾素調(diào)節(jié)因子抗原TRAILR2/DR5/CD262  腫瘤調(diào)亡素/死亡受體5抗體

IRAK 2  白介素-1受體相關(guān)激酶2TRAILR1/DR4/APO2  死亡受體4抗體

茶堿IL-1RA (Interleukin-1 receptor antagonist)peptide  白介素-1受體拮抗劑抗原TRAIL  腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體抗體

D十-無水葡萄糖Integrin a7(integrin alpha 7)  整合素α7抗原TRAF7  腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子7抗體

脫水穿心蓮內(nèi)酯integrin Beta1(ITG- Beta1/CD29)  粘附分子整合素β1抗原TRAF6  腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6抗體
轉(zhuǎn)基因小麥ubiquitin基因核酸檢測(cè)試劑盒1-NaphthylPP1　1-PP1萘　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Aliskirenhemifumarate　阿利克侖半富馬鹽　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

EpothiloneD　埃博霉素D　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Calciumlevofolinate　左亞葉鈣；甲酰四氫葉鈣　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Afatinibdimaleate/BIBW2992-MA2　阿法替尼雙馬來鹽　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Citicolinesodium　胞磷膽鈉;5-胞苷二磷單鈉鹽　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Erythromycinstearate　硬脂紅霉素　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Spermine　精胺　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Spermidine　亞精胺　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Spermidinephosphatesalthexahydrate　亞精胺磷鹽　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

MyriocinfromMyceliasterilia　多球殼菌素；嗜熱菌殺酵母素（來源于無孢霉群）　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Spermidinetrihydrochloride　亞精胺鹽鹽　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Castanospermine　栗精胺　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Sperminetetrahydrochloride　精胺四鹽鹽;鹽精胺　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

D-Luciferinpotassium　D-熒光素鉀鹽，D-蟲熒光素鉀鹽　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR