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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> GEHMT2和EHMT1抑制劑
貨號(hào) | FS-X10527 |
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中文名稱:GEHMT2和EHMT1抑制劑
英文名稱:UNC0638
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10527
產(chǎn)品介紹:
英文名稱:UNC0638 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg UNC0638是一種有效的G9a(EHMT2)(IC50<15nM)和GLP(EHMT1)(IC50=19nM)抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1255580-76-7 純度:98.60% 分子式:C??H??N?O? 分子量:509.73 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
泡盛曲霉酪相關(guān)蛋白1抗體Anti-IL7R Antibody松弛肽(RLN)
灰銹赤鏈霉菌推定NFκB激活蛋白20抗體Anti-ING1 Antibody松弛/胰島樣肽受體3(RXFP3)
釀酒酵母Src激活和信號(hào)分子蛋白抗體Anti-INA Antibody松弛/胰島樣肽受體1(RXFP1)
野別樣希瓦氏菌腫瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白6結(jié)合蛋白抗體Anti-INPP5D Antibody四旋蛋白9(TSPAN9)
科貝特氏菌屬B淋巴基因1抗體Anti-INHA(Inhibin α) Antibody四旋蛋白8(TSPAN8)
紅色紅菇T活化連接蛋白抗體Anti-Inhibin alpha/INHA Antibody四旋蛋白7(TSPAN7)
青紫鏈霉菌轉(zhuǎn)錄共激活因子TAZ抗體Anti-INPPL1 Antibody四旋蛋白6(TSPAN6)
多主葡萄殼菌凝血(II)輕鏈抗體Anti-Insig1 Antibody四旋蛋白5(TSPAN5)
維氏紅細(xì)菌凝血(II)激活肽1抗體Anti-INSR Antibody四旋蛋白4(TSPAN4)
靈芝(紅芝, 赤芝)凝血(II)激活肽2抗體Anti-INSR Antibody四旋蛋白30(TSPAN30)
球孢白僵菌Tafazzin蛋白抗體Anti-Integrin alpha V/ITGAV Antibody四旋蛋白3(TSPAN3)
圣保羅沙門氏菌TEC酪激蛋白抗體Anti-Integrin beta 4/ITGB4 Antibody四旋蛋白27(TSPAN27)
鹽反硝化枝芽孢桿菌鈣轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體Anti-Integrin beta 5/ITGB5 Antibody四旋蛋白2(TSPAN2)
綠色粘帚霉金屬蛋白組織抑制因子-2抗體Anti-IQGAP1 Antibody四旋蛋白1(TSPAN1)
腫瘤壞死因子配體超家族成員19抗體Anti-IQGAP1 Antibody四加半LIM域蛋白1(FHL1)
高地芽孢桿菌腫瘤壞死因子配體超家族成員9抗體Anti-IQGAP2 Antibody死亡誘導(dǎo)終結(jié)因子1(DIDO1)
SLU7蛋白抗體緩慢葡萄球菌小鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞
絲/蘇蛋白磷3B抗體食菌屬小鼠肺泡巨噬細(xì)胞
絲/蘇激25抗體噬瓊膠海水菌小鼠小腦顆粒細(xì)胞
絲蛋白抑制劑A10抗體梭形芽孢桿菌屬小鼠神經(jīng)元細(xì)胞
GEHMT2和EHMT1抑制劑淡紫擬青霉 癸二E選擇
麥根腐平臍蠕孢 3-溴-4-氟FMS樣酪激3
黑曲霉 2-乙基苯肼 鹽鹽MAX二聚化蛋白1
枯草芽孢桿 噻吩-2-頻哪酯Mx基因
枯草芽孢桿 Fmoc-L-beta-高苯N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖
皺紋單胞 Fmoc-L-beta-高異亮S100B蛋白
白葉枯病* Fmoc-3-L-氨基丁Toll樣受體4
鑲邊鏈霉 FMOC-L-β-高亮Toll樣受體7
葡萄座腔 (S)-1-Fmoc--3-甲T亞群
大腸桿 Fmoc-L-3-吖丁啶羧α干擾
枯草芽孢桿 苯乙烯-D8β干擾
穗狀平臍蠕孢 2,3,4-三氟甲苯γ氨基丁
同心環(huán)青霉 2,5-二氟苯γ干擾
粉肉擬層孔 四聚乙二單辛白蛋白
大腸埃希氏 1-Boc-3-氨基吖丁啶白分化抗原4
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