實(shí)時(shí)熒光定量PCR：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過(guò)對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無(wú)需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對(duì)數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。
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參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：油菜內(nèi)源基因核酸檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：48T   0.1PCR管
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-P10753
產(chǎn)品分類：熒光探針?lè)?/font>
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
定量PCR方法：
a、競(jìng)爭(zhēng)法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中，待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增（其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記）。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段，而待測(cè)模板不被酶切，可通過(guò)電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開(kāi)，分別測(cè)定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí)，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開(kāi)來(lái)，分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度，以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn)，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。
PCR的反應(yīng)條件：
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小，設(shè)定25～30個(gè)循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會(huì)出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實(shí)驗(yàn)可2℃間隔進(jìn)行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時(shí)，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時(shí), 時(shí)間設(shè)定可稍長(zhǎng)一些。通常，Anneal溫度太高，有時(shí)會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時(shí)，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時(shí)間太短時(shí)，會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會(huì)有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時(shí)間太長(zhǎng)時(shí)，會(huì)出現(xiàn)Smear。
谷氨棒桿菌培養(yǎng)基: CM0002產(chǎn)賴氨。提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 30℃ 真空冷凍干燥法；定期移植法

福氏志賀氏菌生長(zhǎng)條件: 37℃，好氧培養(yǎng)基: 營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂：蛋白胨 10.0 g，牛肉提取物 3.0 g，NaCl 5.0 g，瓊脂 15.0 g，蒸餾水 1.0 L，pH 7.0提供形式: 凍干粉安全等級(jí): 2模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

陰溝腸桿菌培養(yǎng)基: 33模式菌株: no土樣提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 37℃ -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;其他

 HBUM73997模式菌株: no安全等級(jí): 1種屬: Streptomyces│sp.土壤提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: 0305生長(zhǎng)條件: 28℃

 -1561℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

貝倫格勒座腔菌梨專化型植物病原物；用于Botryosphaeria系統(tǒng)學(xué)研究模式菌株: no蘋果樹(shù)干基部提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 14生長(zhǎng)條件: 25

蘋果雙殼菌生長(zhǎng)條件: 25培養(yǎng)基: 14植物/蘋果/葉片提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no 定期移植法

露水雞縱生長(zhǎng)條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 14提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no -80℃冰箱凍結(jié)法；礦物油法；定期移植法

非O1群霍亂弧菌培養(yǎng)基: CM0116制備VBO血清　非O1　VBO-19提供形式: 凍干物安全等級(jí): 3模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 37℃ 真空冷凍干燥法

青霉培養(yǎng)基: 0015脫氧核糖核酶(優(yōu)良菌株)提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 25-28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

鏈霉菌屬活性物質(zhì)，卡斯帕酶7抑制活性模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: CM0038生長(zhǎng)條件: 28C

 -1562℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

巴氏醋桿菌生長(zhǎng)條件: 30℃培養(yǎng)基: 0001提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

深海彎曲菌(加詞待譯)培養(yǎng)基: 1001潛在的有機(jī)污染物降解菌/分離自石油降解菌群水樣/表層海水提供形式: 凍干物模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

果生鏈核盤菌培養(yǎng)基: 14模式菌株: no自然發(fā)病果提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 22－25 定期移植法

枯草芽孢桿菌枯草亞種生長(zhǎng)條件: 30℃培養(yǎng)基: 0002提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

羽扇豆IL-7(Interleukin-7)  白介素7抗原TRBF1/TRF1  端粒體復(fù)制結(jié)合因子1抗體

白樺脂; 樺木IL-6R Alpha (IL6R-alpha)  白介素6受體α抗原TRAP220/MED1  甲狀腺受體相關(guān)蛋白220抗體

白樺脂gp130/IL-6R  白介素-6受體抗原TRAP/Tartrate Resistant Acid Phosphatase  端粒酶調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白抗體

地索苷; 延齡草苷IL-7Ra/CD127 peptide  白介素-7受體a抗原Transthyretin  轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白抗體

異烏藥內(nèi)酯；異烏藥內(nèi)酯ING1/p33(inhibitor of growth gene 1)  生長(zhǎng)抑制因子基因1抗原Transportin 1  轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體

高香草Inhibin Alpha  抑制素α抗原Transketolase(NT)  轉(zhuǎn)酮酶(轉(zhuǎn)羥乙酶)抗體（N端）

R型原人參二Inhibin beta A peptide  抑制素beta A抗原Transketolase(CT)  轉(zhuǎn)酮酶(轉(zhuǎn)羥乙酶)抗體（C端）

文多靈Inhibin beta B  抑制素βB抗原Transglutaminase 2/TGase2  轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶2抗體

長(zhǎng)春質(zhì)堿Integrin Alpha3  整合素α3抗原Transglutaminase  轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶1抗體

異甘草素Integrin Beta5  整合素β5抗原Transferrin(1F10)  轉(zhuǎn)鐵蛋白單克隆抗體
油菜內(nèi)源基因核酸檢測(cè)試劑盒Acetylsalicylicacid　鄰乙酰水楊/阿司匹林(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Orlistat(Fermentation)　奧利司他（發(fā)酵）　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Orlistat(Fermentation)　奧利司他（發(fā)酵）　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Nicardipinehydrochloride　鹽尼卡地平　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Nicardipinehydrochloride　鹽尼卡地平（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Montelukastsodium　孟魯司特鈉　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Montelukastsodium　孟魯司特鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

β-Glucanase　β-葡聚糖酶　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

telbivudine　2-脫氧-L-胸苷/替比夫定　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

telbivudine　替比夫定(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Cyclen/1,4,7,10-Tetraazacyclododecane　輪環(huán)藤寧/1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Raltitrexed　雷替曲塞　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

L-OrnithineL-aspartatesalt　L-鳥(niǎo)氨L-天門冬氨鹽　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Dipyridamole　雙嘧達(dá)莫　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Tamibarotene　他米巴羅汀　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR