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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> DOT1L抑制劑(EPZ004777)
貨號(hào) | FS-X10573 |
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中文名稱:DOT1L抑制劑(EPZ004777)
英文名稱:EPZ004777
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10573
產(chǎn)品介紹:
EPZ004777是一種有效的選擇性DOT1L抑制劑,IC50為0.4nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1338466-77-5 純度:99.89% 分子量:539.67 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
巴奈特酵母快速發(fā)育生長(zhǎng)因子同源蛋白2抗體Anti-NTRK1 Antibody卵質(zhì)1(OVCH1)
煙管菌SPNS1抗體Anti-NTRK1 Antibody卵泡抑樣蛋白1(FSTL1)
布氏白僵菌(卵孢白僵菌)跨膜蛋白SEMA4A抗體Anti-NTRK1 Antibody卵泡激受體(FSHR)
枯草芽胞桿菌突觸相關(guān)蛋白23抗體Anti-NTRK2 Antibody膽固脂酰轉(zhuǎn)移(LCAT)
釀酒酵母突觸相關(guān)蛋白97抗體Anti-NTRK2 Antibody卵巢濾泡激(FLCN)
大腸桿菌神經(jīng)囊泡循環(huán)蛋白2抗體Anti-NTRK2 Antibody龍蝦肽樣金屬內(nèi)肽(ASTL)
磚紅鐮刀菌突觸相關(guān)蛋白29抗體Anti-NTRK3 Antibody瘤變抑制因子14(ST14)
紅緣擬層孔菌突觸相關(guān)蛋白25結(jié)合蛋白抗體Anti-NUCB2 Antibody硫氧還蛋白結(jié)合蛋白2(TBP2)
解淀粉芽孢桿菌解淀粉亞種突觸泡蛋白2B抗體Anti-NTRK3 Antibody硫氧還蛋白還原3(TrxR3)
紫晶臘蘑突觸泡蛋白2C抗體Anti-NUMB Antibody硫氧還蛋白還原2(TrxR2)
史氏芽胞桿菌突觸囊泡蛋白抗體Anti-NUP214 Antibody硫氧還蛋白還原1(TrxR1)
Sphingopyxis ummariensis 胞吐分泌蛋白Sec8抗體Anti-NUP214 Antibody硫氧還蛋白1(SRXN1)
泡盛曲霉分化蛋白SEPT6抗體Anti-NUP98 Antibody硫酯2(SULF2)
釀酒酵母多配體聚糖結(jié)合蛋白1抗體Anti-OAS3 Antibody硫酯1(SULF1)
釘斑鏈霉菌磷肌磷蛋白INPP5G抗體Anti-Occludin/OCLN Antibody硫皮膚差向異構(gòu)(DSE)
根瘤菌磷肌磷蛋白INPP5H抗體Anti-OCLN Antibody硫肝蛋白聚糖2(HSPG2)
氧化固結(jié)合蛋白8抗體Corynebacteriumamycolatum人子宮頸上皮細(xì)胞提取物
少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子1西宮皮生球菌人胚胎絨毛膜細(xì)胞提取物
腫瘤/睪丸抗原117胺胨羅斯氏菌人胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞提取物
土霉抗體Sphingobiumsuberifaciens人胎盤羊膜細(xì)胞提取物
DOT1L抑制劑(EPZ004777)芽枝狀枝霉 環(huán)庚甲一氧化氮合
輪蟲弧 (R)-(+)-1,1-聯(lián)萘-2-甲氧基-2-二苯膦X型膠原蛋白
運(yùn)動(dòng)膠杜搟氏 3-溴-2-甲基烯甲胎蛋白
鼠李糖乳桿 二乙酰二(三苯基膦)鈀胰高血糖樣肽2
奇異球 替卡格雷中間體44,6-二-2-(硫基)-5-氨基嘧啶,卵泡受體
矩圓黑盤孢 格列奈S轉(zhuǎn)移α
平菇 1-壬硫環(huán)氧化合物水解1
黃孢平革 3-并噻吩中性粒明膠相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白
遲鈍愛德華氏 1-十七烷總超氧化物歧化
側(cè)耳 6-溴-1-茚滿酮C-反應(yīng)蛋白
PL20(雙抗黑平) 6--1-茚酮黃體生成
加利福尼亞接合擬威爾酵母 1-芐基-3-乙氧羰基-4-酮鹽鹽轉(zhuǎn)鈷蛋白Ⅰ
大豆慢生根瘤 6-溴-4-羥基喹啉鐵調(diào)
球孢白僵 4-(乙基硫代)苯骨形成蛋白6
*櫻桃鏈格孢 2-己基磺酰全反鈷
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