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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> MLCK和TRPC6通道抑制劑
貨號(hào) | FS-X10758 |
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產(chǎn)品介紹:
ML-7hydrochloride是一種萘磺酰胺衍生物,有效抑制MLCK(IC50=300nM)和TRPC6通道(IC50>10μM)。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):110448-33-4 純度:98.18% 分子量:452.74 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
中文名稱:MLCK和TRPC6通道抑制劑
英文名稱:ML-7 hydrochloride
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg
貨號(hào):FS-X10758
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
黃須腹菌神經(jīng)肽 Y(1-36)Anti-GUCY1B1 Antibody人28S抗核糖體抗體(28S rRNP)
黑附球菌神經(jīng)保護(hù)肽Anti-GUCY1B2 Antibody人28S抗核糖體抗體(28S rRNP)
雙孢蘑菇神經(jīng)絲蛋白蛋白多肽Anti-GUSBP1 Antibody人抗核仁抗體(ANA)
瓊氏不動(dòng)桿菌土霉偶聯(lián)牛血清白蛋白Anti-GZMB Antibody人抗核仁抗體(ANA)
多主葡萄殼菌土霉偶聯(lián)雞卵白蛋白Anti-GYPC Antibody人抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)
根瘤菌雞卵白蛋白Anti-GUF1 Antibody人抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)
豌豆根瘤菌抗腫瘤P53抗原Anti-GZMK Antibody人抗肝胞質(zhì)1型抗體(LC1)
淀粉鏈霉菌撲克蒙蛋白Anti-H1-5 Antibody人抗肝胞質(zhì)1型抗體(LC1)
褐色馬勃核糖體蛋白S6激1Anti-GZMH Antibody人抗肺泡基底膜抗體(ABM-Ab)
黃棕鏈霉菌蛋白AAnti-H1-0 Antibody人抗肺泡基底膜抗體(ABM-Ab)
Lasiodiplodia rubropurpureaP-糖蛋白抗原Anti-H1FOO Antibody人抗胸腺球蛋白(ATG)
束叢鏈霉菌磷化受體結(jié)合絲蘇激2Anti-H2AC11 Antibody人抗胸腺球蛋白(ATG)
深粘紅酵母萊克多巴與牛血清白蛋白偶聯(lián)物Anti-H1FOO Antibody人抗表皮基底膜抗體(EBMZ)
達(dá)格斯坦鏈霉菌萊克多巴與血藍(lán)蛋白偶聯(lián)物Anti-H2AFX Antibody人抗表皮基底膜抗體(EBMZ)
玉蕈(真姬菇)重組乙肝病表面抗原Anti-H2AC11 Antibody人抗中性粒/中心體抗體(ACA)
煙管菌Alexa Fluor 647標(biāo)記兔IgG(流式同型對(duì)照)Anti-H2AC4 Antibody人抗中性粒/中心體抗體(ACA)
神經(jīng)突觸相關(guān)蛋白SLITRK5抗體綠穗霉人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
神經(jīng)突觸相關(guān)蛋白SLITRK6抗體根霉屬的種人Burkkit淋巴瘤細(xì)胞
液泡蛋白分選受體SORCS2抗體三寶壟根霉人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
轉(zhuǎn)錄因子21抗體銀耳、白木耳人甲狀腺癌細(xì)胞HTh-7(干細(xì)胞庫保藏)
MLCK和TRPC6通道抑制劑雅氏艾美耳球蟲 雙歧桿BS培養(yǎng)基(不含瓊脂)纖維二糖
彎曲芽胞桿 動(dòng)力培養(yǎng)基纖維木糖
球孢白僵 鄰苯二甲二異癸酯糖皮質(zhì)
大腸埃希 TGY瓊脂甲狀旁腺
冬克青霉 RSMA培養(yǎng)基抗性磷
Sphingomonas oligoaromativorans 鄰單胞鑒別瓊脂Ⅰ型膠原C端肽
枯草芽孢桿 硫鹽還原專屬培養(yǎng)基(postgate培養(yǎng)基)I型前膠原氨基端肽
黑木耳 3,4'-二氨基二苯基副流感病
金針菇(F4-11) 凍干兔血漿脂肪合成
平菇 R3增殖培養(yǎng)基6-磷葡萄糖脫氫
皺褶假絲酵母 沙保羅氏瓊脂硬脂酰去飽和
苜蓿莖點(diǎn)霉 疊氮磷二苯酯(DPPA)酮脫氫激4
秀珍菇 厭氧產(chǎn)氣包口蹄疫病非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC
曲霉疏展變種 多粘B(4ug)骨化二
黃桿 硫新霉(100ug)骨化三
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