Pim抑制劑(SGI-1776)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X10688

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：Pim抑制劑(SGI-1776)

英文名稱：SGI-1776

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

貨號：FS-X10688

產(chǎn)品介紹:

SGI-1776是一種Pim抑制劑，能夠抑制Pim-1，Pim-2和Pim-3的活性，IC50值分別為7nM，363nM和69nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1025065-69-3

純度：99.70%

分子量：405.42

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

大腸埃希菌毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗原Anti-BTC AntibodyVav1癌基因(VAV1)

枯草芽孢桿菌活化轉(zhuǎn)錄因子6抗原Anti-BTN3A1 AntibodyVasorin蛋白(VASN)

大豆慢生根瘤菌鈉ATP通道蛋白抗原Anti-BTF3L4 AntibodyVang樣蛋白2(VANGL2)

細(xì)黃鏈霉菌ATP敏感性通道亞基kir6.2抗原Anti-BUB1B AntibodyUSP6基端樣蛋白(USP6NL)

河北木霉精加壓受體2抗原Anti-BUD31 AntibodyUL16結(jié)合蛋白2(ULBP2)

黑曲霉光激B抗原Anti-C1QB AntibodyUDP葡萄糖神經(jīng)酰葡萄糖基轉(zhuǎn)移(UGCG)

馬桑殼針孢*孤菲肽（痛敏肽）（抗原）Anti-C1QC AntibodyUDP葡糖基轉(zhuǎn)移1家族多肽A1(UGT1A1)

程序性死亡配體1（多肽）Anti-C1QL2 AntibodyUDP半乳糖-4-差向異構(gòu)(GALE)

蘋果盤二孢孤菲肽受體（痛敏肽受體）（抗原）Anti-C1QL2 AntibodyT-免疫調(diào)節(jié)因子1(TCIRG1)

鏈霉菌軸索過度生長抑制因子-A（抗原）Anti-C1S AntibodyT-可誘導(dǎo)共激分子配體(ICOSLG)

二孢接合酵母軸索過度生長抑制因子受體（多肽抗原）Anti-C2CD6 AntibodyT-可誘導(dǎo)共激分子(ICOS)

粗毛擬革蓋菌相關(guān)死亡促進(jìn)因子Bad抗原Anti-C3AR1 AntibodyT-激活連接蛋白(LAT)

美澳型核果褐腐病菌相關(guān)死亡促進(jìn)因子Bad抗原Anti-C5orf13 AntibodyT-白血病/淋巴瘤蛋白1A(TCL1A)

尖孢鐮刀菌磷化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體Anti-C4A AntibodyT-框蛋白6(TBX6)

短小芽孢桿菌Bcl-2同源拮抗劑Bak（多肽）Anti-C5AR1 AntibodyT-框蛋白5(TBX5)

黃色毛霉一氧化氮合成-1（抗原）Anti-C8B AntibodyT-框蛋白4(TBX4)

原鈣粘附蛋白20抗體Loktanellafryxellensis人burkitt淋巴瘤細(xì)胞

原鈣粘附蛋白8抗體Shimiamarina小鼠腎癌細(xì)胞

原鈣粘附蛋白α1抗體Marivitalitorea正常星形膠質(zhì)細(xì)胞

原鈣粘附蛋白α3抗體Gramellaportivictoriae小鼠胰腺癌細(xì)胞
Pim抑制劑(SGI-1776)金黃弗拉特氏 (1S,2S)-(-)-1,2-環(huán)己二D-鹽CD63分子

圍小叢殼 1-苯基-1-炔多殺性巴氏桿抗原B2

雕刻擬盤多毛孢 N-芐基奎寧[手性相轉(zhuǎn)移催化劑]T2

奇異球?qū)?/span> 3-氨基-2-己內(nèi)酰玉赤霉烯酮

海水甲基桿 2-苯基咪唑

高盧蜜環(huán) N-甲基-2-(2-)吡咯烷赭曲霉

千葉鏈霉 2--6-氟苯甲肽聚糖

釀酒酵母 1,8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯肽聚糖識別蛋白

郝氏鏈霉氘代酮堿性成纖維生長因子2

香菇8 2-甲基丁異酯腹瀉病

松杉靈芝鹽金剛烷牛小腸堿性磷

苜蓿中華根瘤 2-甲基-3-硝基三氟甲苯腎上腺

芹側(cè)耳 N'-異亞基-2-磺?；|(zhì)金屬蛋白2

假堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿四乙基氟化水合物基質(zhì)金屬蛋白9

鏈霉 1,3-二甲基-6-氨基脲嘧啶維生H
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)