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貨號 | FS-X10615 |
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英文名稱:Bardoxolone
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10615
產(chǎn)品介紹:
Bardoxolone是一種新型核調(diào)節(jié)因子(Nrf-2)激活劑。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:218600-44-3 別名:CDDO;RTA 401 純度:99.21% 分子量:491.66 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
大腸埃希氏菌FITC標(biāo)記的羊抗人IgMAnti-SFTPD Antibody核糖體蛋白L6(RPL6)
豌豆根瘤菌FITC標(biāo)記的羊抗人IgGAnti-SFTPB Antibody核糖體蛋白L23A(RPL23A)
光帽鱗傘膠體金標(biāo)記的羊抗人IgGAnti-SFTPA1 Antibody核糖體蛋白L13A(RPL13A)
PX459 V2.0FITC標(biāo)記的兔抗人IgGAnti-SFTPA1/2 Antibody(PB0433)核糖激(RBKS)
異常畢赤酵母辣根過氧化物標(biāo)記的兔抗馬IgMAnti-SGCA Antibody核糖核抑制因子(RI)
玫瑰黃鞘單胞菌Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗人IgGAnti-SGK1 Antibody核糖核外切3(ERI3)
運動節(jié)桿菌Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗人IgGAnti-SGK1 Antibody核糖核外切2(ERI2)
大腸埃希氏菌PE標(biāo)記的鼠抗人IgG單克抗體Anti-SGK1 Antibody核糖核外切1(ERI1)
野土地桿菌辣根過氧化物標(biāo)記兔抗人IgAAnti-SHANK3 Antibody核糖核T2(RNASET2)
魯酵母生物標(biāo)記的鼠抗人IgG單克抗體Anti-SHBG Antibody核糖核P(RNASEP)
棒桿菌屬生物標(biāo)記的兔抗人IgGAnti-SHC1 Antibody核糖核L(RNASEL)
Bacillus aryabhattai生物標(biāo)記的小鼠抗人IgGAnti-SHFM1 Antibody核糖核K(RNASEK)
釀酒酵母生物標(biāo)記的兔抗人分泌型IgAAnti-SHH Antibody核糖核H(RNASEH)
埃及枝頂孢生物標(biāo)記的羊抗人IgMAnti-SHC1 Antibody(PB0435)核糖核A9(RNASE9)
香草蘭根疾Alexa Fluor 488標(biāo)記的驢抗人IgGAnti-SHMT1 Antibody核糖核A8(RNASE8)
黃桿菌PE-CY5標(biāo)記的兔抗人IgGAnti-SHISA7 Antibody核糖核A7(RNASE7)
核纖層蛋白A識別因子抗體Bacillussubterraneus大鼠膀胱上皮細胞提取物
中性鞘磷脂2抗體Helcococcuskunzii大鼠腎小球內(nèi)皮細胞提取物
核受體蛋白NR2E1抗體脫葉鏈霉菌大鼠心肌細胞提取物
N-乙基順丁烯二酰亞胺敏感融合蛋白抗體梭菌屬大鼠冠狀動脈內(nèi)皮細胞提取物
Nrf-2激活劑(Bardoxolone)多形布勒擔(dān)子酵母 硅烷基 2,2-二氟-2-(氟磺酰)醋鹽媾疫錐蟲抗體
香菇(L988) 9-吖啶尼帕病抗體
地衣芽孢桿 2-氨基嘧啶-5-甲非酯化脂肪
盤長孢狀盤孢 5-降烯-2-羧馬心脂肪結(jié)合蛋白
蠟蚧 N-Boc-1-氨基環(huán)丁烷羧馬結(jié)合珠蛋白;觸珠蛋白
IBV M41 HAR/HI serum 陽性血清(荷蘭引進) 4,6-二甲基二苯并噻吩輔肌動蛋白α1
間型串珠鐮孢 納碳化鋯輔肌動蛋白α2
昆明鏈霉 碳化鎢轉(zhuǎn)錄激活因子-1
蘇云金芽孢桿蘇云金亞種 碳化鈦(粉末)轉(zhuǎn)錄激活因子-2
根瘤 碳化鉭磷脂酰肌蛋白聚糖1
唐菖蒲青霉 碳化鈮磷脂酰肌蛋白聚糖4
冷變紫薄層 碳化鉿絡(luò)絲蛋白
粉紅單端孢霉 堿式碳銅緊密連接蛋白
就地堆肥地芽孢桿 硒化鉍(III)組織因子
克魯維畢赤酵母克魯維變種 五氧化三鈦組織因子途徑抑制物
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