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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> BET bromodomain抑制劑(GSK525762A)
貨號(hào) | FS-X10355 |
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中文名稱(chēng):BET bromodomain抑制劑(GSK525762A)
英文名稱(chēng):GSK 525762A
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg
貨號(hào):FS-X10355
產(chǎn)品介紹:
英文名稱(chēng):GSK 525762A 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg GSK525762A是一種BET bromodomain抑制劑,IC50為32.5-42.5nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1260907-17-2 別名:I-BET 762 純度:99.85% 分子量:423.9 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
大腸桿菌磷化蛋白激C底物Marcks抗體Human INTS3(IntegRator complex subunit 3) 顆粒體蛋白(GRN)
弗氏志賀氏菌磷化蛋白激C底物Marcks抗體Human GPX1(Glutathione peroxidase 1) 顆粒溶(GNLY)
地衣芽胞桿菌肝生長(zhǎng)因子受體抗體Human GPT2(Alanine aminotransferase 2) 顆粒H(GZMH/CGL2/CTSGL2)
產(chǎn)色鏈霉菌磷化絲裂原活化蛋白激3K9抗體Human EPB42(Erythrocyte membrane protein band 4.2) 顆粒B(Gzms-B)
黃曲霉受體酪激抗體Human LPO(Lactoperoxidase) 顆粒A(Gzms-A)
蠟狀芽孢桿菌絲裂原活化蛋白激3K9抗體Human SESN3(Sestrin-3) 人抗組織轉(zhuǎn)谷酰抗體IgA(tTG-IgA)
尖孢鐮刀菌黑皮質(zhì)3受體抗體Human CTSK(Cathepsin K) 人抗組蛋白抗體(AHA)
假單胞菌屬Menin抑癌蛋白抗體Human SERPINH1(Serpin H1) 人抗內(nèi)膜抗體(EMAb)
異常威克漢姆酵母錯(cuò)配修復(fù)蛋白3抗體Human MAT1A(S-adenosylmethionine synthase isoform type-1) 人抗滋養(yǎng)膜抗體(ATA)
馬勃微小染色體維持缺陷蛋白7抗體Human DEFB103A(Beta-defensin 103) 人抗中性粒顆??贵w(ANGA)
伊氏副球菌單核趨化蛋白2抗體(小鼠)Human ACAT1(Acetyl-CoA acetyltransferase, mitochondrial) 人抗中性??贵w(ANA)
洋蔥伯克霍爾德氏菌單核趨化蛋白3抗體Human ITGAV(Integrin alpha-V) 人抗中性粒核周抗體(pANCA)
金針菇(毛柄金錢(qián)菌、冬菇)單核趨化蛋白3抗體Human KLK2(Kallikrein-2) 人抗中性粒胞漿抗體(cANCA)
大腸埃希氏菌(大腸桿菌)巨噬炎癥蛋白18抗體Human ETFDH(Electron transfer flavoprotein-ubiquinone oxidoreductase, mitochondrial) 人抗中性粒/中心體抗體(ACA)
棱蓋多孔菌MITF相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體Human PCCB(Propionyl-CoA carboxylase beta chain, mitochondrial) 人抗著絲點(diǎn)抗體(ACA/CENP)
梨黑斑鏈格孢雷帕霉靶蛋白抗體Human PENK(Proenkephalin-A) 人抗著絲點(diǎn)抗體(ACA)
鵝艾美耳球蟲(chóng)Eimeria│anseris 質(zhì)量規(guī)格:>98%
暗產(chǎn)色鏈霉菌Streptomyces│phaeochromogenes 質(zhì)量規(guī)格:1:12000,BR芹菜
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:≥30units/mg protein,sigma分裝莽草
BET bromodomain抑制劑(GSK525762A)木拉克酵母屬 N-芐基奎寧[手性相轉(zhuǎn)移催化劑]卵巢癌標(biāo)志物
燕麥?zhǔn)任鞴蟻喎N* N-芐基化喹啶嗡[手性相轉(zhuǎn)移催化劑]
硬柄皮傘 N-芐基化辛可寧丁膽固?;D(zhuǎn)移
白地霉 (+)-4,5-雙[羥基(二苯基)甲基]-2-甲基-2-苯基-1,3-二氧戊環(huán)卵清蛋白特異性IgE
樹(shù)劍 (-)-4,5-雙[羥基(二苯基)甲基]-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環(huán)卵清蛋白特異性IgG
紅曲霉 (R)-(+)-1-芐基-3-吡咯烷卵清蛋白特異性IgG1
疣孢馬杜拉放線(xiàn) (R)-4-芐基噻唑啉-2-硫酮錳超氧化物歧化
根霉 N-Boc-反式-4-氟-L-脯甲酯糜蛋白
洋蔥曲霉 (S,S)-1,2-雙[(叔丁基)甲基膦]乙烷[η-(2,5-二環(huán)庚二烯)]合四氟銠(I)球蛋白A
節(jié)桿 (+)-4,5-雙[羥基(二苯基)甲基]-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環(huán)球蛋白E
翹鱗傘 Boc-4--L-苯球蛋白G
熱帶假絲酵母 (S)-N-BOC-4-溴苯球蛋白G1
棒桿屬 2-甲基3-(三氟甲基)球蛋白G2a
巴西果小克銀漢霉 4--3-(三氟甲基)芐球蛋白M
片球?qū)?/span> 5-降烯-2-羧甲酯(內(nèi)型和外型的混和物)繆勒管抑制物質(zhì);抗繆勒管
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