蛋白激酶CK2抑制劑(TBB)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10686

產(chǎn)品介紹:

TBB是一種選擇性的蛋白激酶CK2(CK2)抑制劑，IC50為1.6μM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：17374-26-4

別名：NSC 231634;TBB (enzyme inhibitor)

純度：98.14%

分子量：434.71

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

中文名稱：蛋白激酶CK2抑制劑(TBB)

英文名稱：TBB

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg

貨號(hào)：FS-X10686

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

粉肉擬層孔菌絲裂原活化蛋白激激Anti-BEGAIN AntibodyYY1轉(zhuǎn)錄因子(YY1)

大洋枝芽孢桿菌激-M2（抗原）Anti-BEST1 AntibodyYbeY金屬肽(YBEY)

枯草芽孢桿菌激-M2（抗原）Anti-BIRC2 AntibodyX-轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3(Xtrp3)

尖孢鐮孢磷化Rho鳥(niǎo)交換因子2抗原Anti-BHLHE41 AntibodyX-轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(Xtrp2)

茶輪斑盤(pán)多毛孢菌黑色-A（抗原）Anti-BIRC5 AntibodyX-射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白6(XRCC6)

微球菌激活受體2A/激活受體相互作用蛋白2a抗原Anti-BIVM AntibodyX-射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白5(XRCC5)

柞蠶鏈球菌β-抑制蛋白1/2抗原Anti-BLCAP AntibodyX-脯酰肽3(XPNPEP3)

釀酒酵母激活受體2B/激活受體相互作用蛋白2b抗體Anti-BLK AntibodyX-連鎖凋亡蛋白抑制因子(XIAP)

泡囊短波單胞菌褪黑受體（抗原）Anti-BMP10 AntibodyX-框結(jié)合蛋白1(XBP1)

Enterobacter cloacae subsp. dissolvens致癌基因（抗原）Anti-BMP3 AntibodyWolfram綜合征蛋白1(WFS1)

核受體輔助抑制因子（抗原）Anti-BMP10 AntibodyWNT抑制因子1(WIF1)

哈茨木霉巢蛋白（神經(jīng)上皮干蛋白）（抗原）Anti-BMP6 AntibodyWNT1誘導(dǎo)信號(hào)通道蛋白2(WISP2)

灰黃青霉α1腎上腺能受體抗原Anti-BMP8A AntibodyWNT1誘導(dǎo)信號(hào)通道蛋白1(WISP1)

短桿狀馬賽菌脂肪炎癥因子Apelin36Anti-BMP8B AntibodyWhirlin蛋白(WHRN)

栗酒裂殖酵母巢蛋白（神經(jīng)上皮干蛋白）（抗原）Anti-BMX AntibodyWAP四二硫化物核心域蛋白5(WFDC5)

核盤(pán)菌神經(jīng)母特異性轉(zhuǎn)移因子抗原Anti-BNIP2 AntibodyV-Yes-1Yamaguchi肉瘤病相關(guān)癌基因同源物(LYN)

胞粘蛋白結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白抗體Marivitahallyeonensis人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞

過(guò)氧化物膜蛋白1抗體Roseovariusmarinus人B淋巴細(xì)胞

原鈣粘蛋白7抗體Roseivivaxlentus人口腔上皮細(xì)胞

原鈣粘附蛋白11X抗體Paucimonaslemoignei小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞
蛋白激酶CK2抑制劑(TBB)惡臭假單胞 2-氨基-4-中性蛋白

灰綠鏈霉間溴苯口蹄疫病非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體

枯草芽孢桿 2-環(huán)戊酮脂氧合

滑假絲酵母 4-甲基噻唑周期依賴性激2

鏈霉 2,6-二氟芐基周期E2

蘇云金芽胞桿正壬烷凋亡蛋白激活因子1

雞傷門(mén)氏戊基溴化鎂溶液谷脫羧

釀酒酵母十二烷二葡萄糖-6-磷

杉葉散斑殼(都不提供） 2-乙基乙基硫尿二磷葡萄糖轉(zhuǎn)移

間型假絲酵母正丁基化鎂胰蛋白

突尼斯葉桿 N-芐基化辛可寧[手性相轉(zhuǎn)移催化劑]性脂肪

大豆慢生根瘤間苯結(jié)核分枝桿IgG抗體

康寧木霉 N2-異丁?；?2′-脫氧鳥(niǎo)結(jié)核分枝桿IgM抗體

鏈霉 5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-N2-異丁?；?2'-脫氧鳥(niǎo)白血病病

彩色豆馬勃甲基烯異辛酯泡沫病

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