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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> E1抑制劑(PYR-41)
貨號(hào) | FS-X10613 |
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產(chǎn)品介紹:
PYR-41是一種特異的,細(xì)胞可透過的E1抑制劑,IC50值<10μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):418805-02-4 純度:98.0% 分子量:371.3 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
中文名稱:E1抑制劑(PYR-41)
英文名稱:PYR-41
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10613
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
PE-Cy3標(biāo)記的兔抗羊IgMAnti-SEMA3E Antibody黑親和(MLPH)
平菇PE-CY5標(biāo)記的兔抗羊IgMAnti-SENP1 Antibody黑皮質(zhì)激5受體(MC5R)
藍(lán)微褐鏈霉菌辣根過氧化物標(biāo)記的驢抗羊IgGAnti-SERPINA4 Antibody黑皮質(zhì)激4受體(MC4R)
*杏葉斑鏈格孢辣根過氧化物標(biāo)記的小鼠抗羊IgGAnti-SERPINA4 Antibody黑皮質(zhì)激3受體(MC3R)
枯草芽孢桿菌羅丹明標(biāo)記的羊抗大鼠IgGAnti-SERPINA3 Antibody黑瘤抑制性活性蛋白1(MIA1)
泡盛曲霉Cy7標(biāo)記的驢抗豚鼠IgGAnti-SERPINA1 Antibody(PB0371)黑瘤黏附分子(MCAM)
中山氏芽孢乳桿菌中山氏亞種PE標(biāo)記的驢抗豚鼠IgGAnti-SERPINA1 Antibody黑瘤缺乏因子2(AIM2)
嬰兒配方乳粉 低聚果糖PE-Cy3標(biāo)記的驢抗豚鼠IgGAnti-SERPINA5 Antibody黑瘤缺乏因子1(AIM1)
膠孢Cy5標(biāo)記的驢抗豚鼠IgGAnti-SERPINA6 Antibody黑色瘤優(yōu)先表達(dá)抗原(PRAME)
釀酒酵母Alexa Fluor 350標(biāo)記的驢抗豚鼠IgGAnti-SERPINB5 Antibody(PB0311)黑色瘤關(guān)聯(lián)硫軟骨蛋白聚糖(MCSP)
釀酒酵母Alexa Fluor 555標(biāo)記的驢抗豚鼠IgGAnti-SERPINC1 Antibody黑色瘤關(guān)聯(lián)ME20(ME20M)
枯斑擬盤多毛孢Alexa Fluor 647標(biāo)記的驢抗豚鼠IgGAnti-SERPINB2 Antibody(PB0372)黑色聚集激受體1(MCHR1)
木耳屬Cy5標(biāo)記的驢抗羊IgGAnti-SERPINC1 Antibody黑色A(MLANA)
北京諾卡氏菌Alexa Fluor 350標(biāo)記的驢抗羊IgGAnti-SERPINE1 Antibody赫曼斯基普德拉克綜合征蛋白6(HPS6)
根瘤菌膠體金標(biāo)記的羊抗人IgMAnti-SERPINE1 Antibody核轉(zhuǎn)錄因子Y亞基γ(NFYC)
兩歧雙歧桿菌PE-Cy3標(biāo)記的兔抗人分泌型IgAAnti-SERPINH1 Antibody核有絲分裂器蛋白1(NUMA1)
腦低密度脂蛋白受體蛋白1抗體Methylobacteriumaquaticum大鼠成骨細(xì)胞提取物
軸突生長(zhǎng)誘向因子G2抗體Methylobacteriumtarhaniae大鼠腎小管上皮細(xì)胞提取物
軸突蛋白2抗體Methylobacteriumplatani大鼠膀胱平滑肌細(xì)胞提取物
軸突蛋白1Neurexin1α抗體Arthrobacterilicis大鼠腎上皮細(xì)胞提取物
E1抑制劑(PYR-41)根霉屬 鈷鋰?yán)鏉{蟲病抗體
金黃殼囊孢 D-環(huán)基CD63分子
三叉爪鬼筆 (1S,2S)-N,N'-二羥基-N,N'-雙(二苯基乙酰基)環(huán)己烷-1,2-二戊型肝炎病IgG抗體
鷹嘴豆中間根瘤 納鐵鎳戊型肝炎病IgM抗體
空腸彎曲桿 4-十二烷基苯磺血紅蛋白
珊瑚諾卡氏(珊瑚色諾卡氏,珊瑚紅諾卡氏,小原放線) 3-磺酰血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子
枯草芽孢桿 1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵低密度脂蛋白
短小芽孢桿 N-Boc-N-甲基乙二高密度脂蛋白
艾比湖嗜鹽堿紅 Di-μ-methoxobis(1,5-cyclooctadiene)dirhodium(I),98鈣蛋白抑制蛋白
枯草芽孢桿 甲氧基(環(huán)辛二烯)銥(I)二聚體組織蛋白B
釀酒酵母 (1,5-環(huán)辛二烯)二溴化鉑(II)組織蛋白L
指狀游動(dòng)放線 二硫化鎢泰勒蟲
蘋果盤二孢* 氧化鉑(IV)一水合物焦蟲
鏈格孢 一氧化鈦傳染性支氣管炎
解淀粉芽孢桿 二硅化鉬傳染性動(dòng)脈炎
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