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貨號(hào)	FS-X10412

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：G9a和GLP抑制劑(UNC0642)

英文名稱：UNC0642

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10412

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：UNC0642

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

UNC0642是有效地選擇性的G9a/GLP抑制劑，抑制G9a的IC50值小于2.5nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1481677-78-4

純度：99.89%

分子量：546.7

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

水稻節(jié)桿菌磷化磷脂酰肌激抗體Anti-AQP6 Antibody白免疫球蛋白樣受體亞家族B成員4(LILRB4)

彎孢菌磷化蛋白激C α/β2抗體Anti-AQP7 Antibody白抗原DR(HLA-DR)

大腸埃希氏菌蛋白激C α抗體Anti-AQP8 Antibody白抗原B27(HLA-B27)

琉球曲霉磷化激M2抗體Anti-AQP9 Antibody白活化黏附因子(ALCAM)

綠曲霉磷化蛋白激R抗體Anti-AQP9 Antibody白共同抗原(LCA/CD45)

綠垂曲霉磷化蛋白激R抗體Anti-AQP9 Antibody白彈性蛋白(HLE)

球毛殼磷化蛋白激R抗體Anti-AR Antibody白色念珠菌(C.albicans)

直絲淡藍(lán)褐鏈霉菌磷化磷酯Cγ2抗體Anti-ARAF Antibody白三烯E4(LTE4)

大腸埃希氏菌磷化磷酯Cγ2抗體Anti-ARC Antibody白三烯D4(LTD4)

單孢蟲(chóng)道酵母磷酯Cγ1抗體Anti-ARG1 Antibody白三烯C4(LTC4)

橘色硬皮馬勃磷化血小板源性生長(zhǎng)因子受體α/β抗體Anti-AREG Antibody白三烯B4(LTB4)

蛛網(wǎng)不顯枝霉中華變種磷化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體Anti-ARG1 Antibody白介增強(qiáng)子結(jié)合因子2(ILF2/NF45/PRO3063)

需土節(jié)桿菌磷化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體Anti-ARFGAP1 Antibody白介受體相關(guān)激(IRAK)

葡萄球菌屬磷化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體Anti-ARF6 Antibody白介9(IL-9)

草假單胞菌磷化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體Anti-ARG2 Antibody白介8(IL-8/CXCL8)

豌豆根瘤菌磷化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體Anti-ARHGEF1 Antibody(PB1099)白介8(IL-8)

假諾卡氏菌屬菌種Pseudonocardia│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

站前喜鹽芽孢桿菌Halobacillus│yeomjeoni 質(zhì)量規(guī)格：>99%(TLC)，標(biāo)準(zhǔn)品

雅致放射毛霉Actinomucor│elegans 質(zhì)量規(guī)格：>99%,Sigma分裝
G9a和GLP抑制劑(UNC0642)單核增生李斯特氏 2,3-吡二羧酐皮膚T虜獲趨化因子

庫(kù)德里阿茲威畢赤酵母 5-靛紅酐肌動(dòng)蛋白

葡萄座腔 2-溴-4-(三氟甲基)苯乙拓?fù)洚悩?gòu)1

輪枝孢 Boc-O-叔丁基-L-酪球蛋白G4

枯草芽孢桿乙基三苯基化膦Ⅱ

大腸埃希蒎烷Ⅹ

花生科薩克氏 Nα-叔丁氧羰基-N'-基-L-色重組結(jié)核桿熱休克蛋白-65

動(dòng)胞囊三(鄰甲氧基苯基)膦去乙酰化

白布勒擔(dān)孢酵母甘草次(β型）重組結(jié)核桿熱休克蛋白-60

嗜松青霉二羰基四苯基環(huán)戊二烯釕煙酰腺二核

白灰樹(shù)花 5-溴靛紅酐尼克酰磷核糖轉(zhuǎn)移

釀酒酵母 2-聯(lián)苯流行性出血熱IgG抗體

小孢矛束霉 3,4-二甲氧基苯甲酰乙乙酯輔Q10

淡紫擬青霉 5-基-2-氟苯SMURF1

谷棒桿 6-吡啶-2-羧堿性磷
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)