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貨號 | FS-X10833 |
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培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
中文名稱:HDAC抑制劑(Dacinostat)
英文名稱:Dacinostat
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg
貨號:FS-X10833
產(chǎn)品介紹:
Dacinostat是一種有效的HDAC抑制劑,IC50值為32nM;同時可抑制HDAC1的活性,IC50值為9nM,主要用于癌癥研究。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:404951-53-7 別名:NVP-LAQ824;LAQ824 純度:97.23% 分子量:379.45 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
球孢枝孢人C型鈉尿肽Anti-PDRG1 Antibody人多形核白彈性蛋白(PMN Elastase)
Sphingobium大鼠氧化低密度脂蛋白抗體Anti-PDXDC1 Antibody人多形核白彈性蛋白(PMN Elastase)
少根根霉人阿立新AAnti-PEAK1 Antibody人尿激型纖溶原激活物(uPA/PLAU)
Bacillus safensis小鼠色上皮衍生因子Anti-PECAM1 Antibody人尿激型纖溶原激活物(uPA/PLAU)
德假單胞菌大鼠抗平滑肌抗體Anti-PDZD2 Antibody人激肽釋放8(KLK 8)
托姆青霉大鼠核因子κB亞基p65親和肽Anti-PEG3 Antibody人激肽釋放8(KLK 8)
癬囊腔菌小鼠解整合樣金屬蛋白8Anti-PER3 Antibody人激肽釋放6(KLK 6)
蘇云金桿菌武漢亞種人神經(jīng)肽YAnti-Pepsin A Antibody人激肽釋放6(KLK 6)
臭曲霉蒼白變種小鼠抗Anti-Peripherin 1 Antibody人果糖1,6二磷縮(FDA)
黃柄曲霉人腦腸肽Anti-PEX Antibody人果糖1,6二磷縮(FDA)
鴨疫里氏桿菌大鼠纖溶抑制因子/凝血激活的纖溶抑制物Anti-PEX11B Antibody人組織蛋白D(cath-D)
黏液桿菌人乙酰Anti-PEX11G Antibody人組織蛋白D(cath-D)
網(wǎng)狀鐮孢大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢaAnti-PEX19 Antibody人激敏感性脂肪(HSL)
可可乳桿菌小鼠胰島抗體Anti-PEX14 Antibody人激敏感性脂肪(HSL)
大腸埃希氏菌大鼠血小板反應蛋白/凝血敏感蛋白1Anti-PEX14 Antibody人胰激肽原(PK)
藤黃微球菌人腦鈉/腦鈉尿肽Anti-PEX2 Antibody人胰激肽原(PK)
磷化血管生成受體2抗體*粗柄白蘑C3H小鼠骨肉瘤細胞
轉(zhuǎn)錄因子TBX6抗體美澳型核果褐腐病菌正常腎臟上皮細胞
分子伴侶復合體TCP-1α抗體頭孢霉屬小鼠的棕色脂肪腫瘤細胞
睪丸特異激2抗體白齒菌卡波西肉瘤細胞
HDAC抑制劑(Dacinostat)pCDNA3.1(+) 2-基吡表皮生長因子
阿達青霉 4,6-二羥基-2-甲硫基嘧啶細小病
釀酒酵母 2-溴-6-色C氧化
干酪乳桿 2-氟-3-孕酮受體
香魏菇 2-巰基乙烷磺鈉雌二受體
褐帶栓 3,3'-亞甲基二睪酮
銅綠假單胞 L-烯基甘維生A
枯草芽孢桿 4-溴吡啶鹽鹽
Rhizobium miluonense 4-甲氧基苯肼鹽鹽疫巴氏桿抗體
金黃色葡萄球 2-脫氧-D-半乳糖鴨疫巴氏桿抗體
鼠傷門氏 TA2 4-氟-2-三氟甲甘油-3-磷脫氫
金龜子綠僵 2-異乙酯甘油-3-磷脫氫
寬褶菇 2(2-吡啶)酮疫里默氏桿1型
棲土藤黃色單胞 9-溴芴疫里默氏桿
橙灰鏈霉 乙酰酮鈣(CAA)8羥基脫氧鳥
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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