FGFR抑制劑(NVP-BGJ398)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10353

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：FGFR抑制劑(NVP-BGJ398)

英文名稱：NVP-BGJ398

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg

貨號(hào)：FS-X10353

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：NVP-BGJ398

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg

NVP-BGJ398是一種有效的FGFR抑制劑，抑制FGFR1，F(xiàn)GFR2，F(xiàn)GFR3和FGFR4，IC50分別為0.9nM，1.4nM，1nM和60nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：872511-34-7

別名：Infigratinib;BGJ-398

純度：99.88%

分子量：560.48

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

釀酒酵母神經(jīng)元膜糖蛋白錨定蛋白2抗體Human NCOA1(Nuclear receptor coactivator 1) 可溶性髓系觸發(fā)受體-1(sTREM-1)

黃硬皮馬勃MYRIP蛋白抗體Human SLC30A8(Zinc transporter 8) 可溶性瘦受體(sLR)

球孢白僵菌髓磷酯髓鞘蛋白1抗體Human GRIN1(Glutamate Receptor, Ionotropic, N-Methyl-D-Aspartate 1) 可溶性凝集樣氧化低密度脂蛋白受體1(sLOX-1)

大豆慢生根瘤菌巨噬克激因子抗體Human SLC25A12(Calcium-binding mitochondrial carrier protein Aralar1) 可溶性磷脂A2(sPL-A2)

單胞菌膜相關(guān)環(huán)指蛋白4抗體Human UBAP2(Ubiquitin-associated protein 2) 可溶性間皮相關(guān)肽(SMRP)

鏈格孢肌球蛋白輕鏈激抗體Human FSCN2(Fascin-2) 可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)

木糖駒形氏桿菌單紡錘體蛋白激1抗體Human REG3γ(RegeneRating Islet Derived Protein 3 Gamma) 可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)

芽孢桿菌屬有絲分裂阻滯缺陷2樣蛋白2抗體Human CDC42(Cell division control protein 42 homolog) 可溶性核因子κB受體活化因子(sRANK)

細(xì)鏈格孢單氧化B抗體Human S1PR2(Sphingosine 1-phosphate receptor 2) 可溶性凋亡相關(guān)因子配體(sFASL)

野油菜黃單胞菌微小染色體維持缺陷蛋白4抗體Human S1PR3(Sphingosine 1-phosphate receptor 3) 可溶性淀粉前體蛋白α(sAPPα)

擬青霉自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗體Human S1PR4(Sphingosine 1-phosphate receptor 4) 可溶性蛋白185(sp185/HER-2)

產(chǎn)色鏈霉菌髓鞘基因調(diào)控因子抗體Human LPL(Lipoprotein lipase) 可溶性彈性蛋白片段(sELAF)

淡紫擬青霉肌球蛋白結(jié)合蛋白C抗體Human TAC1(Protachykinin-1) 可溶性半乳糖結(jié)合凝集3(Lgals3)

變天藍(lán)鏈霉菌磷化絲裂原活化蛋白激磷1抗體Human PFN2(Profilin-2) 可溶性白抗原G(sHLA-G)

肉桂鏈霉菌促代謝型谷受體2抗體Human MCAb(Melanocyte antibody) 可溶性白介7受體(sIL-7R)

羊巴貝斯蟲（天祝株）代謝型谷受體-3抗體Human NDN(Necdin) 可溶性P選擇(sP-selectin)

大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：700u/mg，羅氏分裝鹽育亨賓

黃曲霉Aspergillus│flavus 質(zhì)量規(guī)格：98%,標(biāo)準(zhǔn)品木糖

毛霉Mucor│sp. 質(zhì)量規(guī)格：98%,BR七葉皂鈉
FGFR抑制劑(NVP-BGJ398)鏈霉 (R,R)-2,6-雙(4-苯基-2-噁唑啉-2-基)吡啶磷化AKT蛋白

芽孢桿 (S)-(+)-2-(苯基)吡咯烷磷化c-Jun氨基末端激

茯苓乙(1R,2S)-2-[N-芐基-N-(苯基磺酰)氨基]-1-苯基酯[交叉反應(yīng)用試劑]磷化IKB alpha

嗜麥芽寡養(yǎng)單胞 (R)-(+)-α,α-二苯基脯氨磷化N-甲基-D-天冬

戊糖乳桿 R-1,1'-聯(lián)-2-萘磷化p38絲裂原活化蛋白激

側(cè)耳 (1R,2S)-2-氨基-1,2-二苯基乙磷化Tau蛋白

嗜冷德沃斯氏 (1S,2R)-2-氨基-1,2-二苯基乙磷化α-氨基羥甲基惡唑

釀酒酵母 (+)-2,2'-[(3aR,8aS)-3a,8a-二氫-8H-茚苯[1,2-d]并噁唑磷化酪激

長(zhǎng)枝木霉 (S,S)-N,N'-雙(三氟磺酰)-1,2-二苯基乙二磷化酪激

芽胞桿 (-)-苯并四咪唑磷化外信號(hào)調(diào)節(jié)激

*蛹蟲草 (2S,3S)-(+)-2,3-雙(二苯基膦基)雙環(huán)[2.2.1]庚-5-烯磷化外信號(hào)調(diào)節(jié)激

產(chǎn)薩頓 (2R,3R)-(-)-2,3-雙(二苯基膦)雙環(huán)[2.2.1]庚-5-烯磷化腺活化蛋白激

施氏假單胞 (+)-苯并四咪唑磷肌激

芽孢桿 (2S,3S)-(-)-雙(二苯基膦)丁烷磷激1

嗜鹽鹽單胞 (1S,2S,4S,5S)-2,5-雙(3,5-二叔丁基-2-羥基苯亞甲基氨基)雙環(huán)[2.2.1]庚磷烯式酮羧激
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)